$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Ten protokół jest fragmentem Possik i Pauzy, Pomiar odporności Caenorhabditis elegans na stres oksydacyjny na 96-dołkowych płytkach mikromiareczkowych, J. Vis. Exp.(2015).
1. Wykonanie testu odporności na stres oksydacyjny
- Odpipetować 40 μl 100 mM roztworu PQ (przygotowanego na świeżo) do każdego dołka na płytce 96-dołkowej. Użyj co najmniej 12 studzienek jako powtórzeń każdego stanu (leczenie, mutant itp.). Za pomocą platynowego kilofa drucianego przenieś 5-8 larw L4 do każdej studzienki, wskazując czas rozpoczęcia i czas zakończenia.
- Uruchamiając inny warunek, zanotuj czas rozpoczęcia i czas zakończenia. Umieścić płytkę w temperaturze 20 °C w czasie inkubacji między przeniesieniem robaków a nacięciem martwych zwierząt godzinę później od czasu rozpoczęcia.
- Za pomocą mikroskopu preparacyjnego policz przeżycie co godzinę. Delikatnie potrząśnij płytką przed rozpoczęciem liczenia. Wskaż robaki, które się nie poruszają, nawet po zauważeniu światła o dużej intensywności, jako martwe zwierzęta. Należy również podać liczbę żyjących zwierząt.
UWAGA: Patrząc na kształt robaka, ogony i ruchy głowy w dużym powiększeniu, pomóż odróżnić martwe robaki od żywych.
- Powtarzaj ten krok co godzinę, aż większość robaków umrze.
2. Określenie procentu przeżycia w każdym punkcie czasowym
- Oblicz całkowitą liczbę zwierząt na warunek, dodając całkowitą liczbę zwierząt przeniesionych do każdej studzienki. Zignoruj zwierzęta, które są uszkodzone lub zabite podczas przenoszenia.
- Dla każdego punktu czasowego oblicz całkowitą liczbę martwych zwierząt na warunek (suma martwych zwierząt w 12 dołkach). Dla każdego punktu czasowego oblicz procent śmierci (liczba martwych zwierząt podzielona przez całkowitą liczbę zwierząt i pomnożona przez 100) oraz procent przeżycia (100 minus procent śmierci).
- Powtórz ten test co najmniej 3 niezależne razy.