Sekcja jelit dorosłego danio pręgowanego: technika analizy wchłaniania związków

Streszczenie

Źródło: Jie J. et al., Doustna intubacja dorosłego danio pręgowanego: model oceny wchłaniania związków bioaktywnych w jelitach. J. Vis. Exp. (2018).

Ten film opisuje technikę izolowania jelita w celu oceny wchłaniania przez jelita związków bioaktywnych. W tej próbce wyizolujemy jelito od dorosłego danio pręgowanego, aby przeanalizować wychwyt immunostymulantów.

Protokół

1. Sekcja jelit danio pręgowanego

1. Po upływie określonego czasu od intubacji (np. 5 godzin i/lub 24 godziny) umieścić ryby za pomocą siatki w roztworze metanosulfonianu etylu (MS-222) o stężeniu 300 mg/l do eutanazji. Upewnij się, że wieczko przestaje się poruszać i nie ma odruchu szczypania ogona. Zwykle wystarczy pięć minut.
2. Podnieś uśpione zwierzę za pomocą siatki i umieść je na bibule filtracyjnej.
   nuta: Bibuła filtracyjna jest bardzo przydatna do usuwania tkanki adhezyjnej wzdłuż jelita.
3. Za pomocą ostrych nożyczek preparacyjnych wykonaj półokrągłe nacięcie od odbytu do wieczka i otwórz nacięcie za pomocą cienkiej pęsety. Odetnij oba końce jelita, wyjmij wszystkie narządy wewnętrzne i umieść je na bibule filtracyjnej.
   ostrożność: Pracuj szybko, aby zmniejszyć metabolizm i śmierć komórki.
   nuta: Alternatywnie, usuń tkankę adhezyjną w PBS i na lodzie.
4. Oddziel jelito od narządów wewnętrznych, upewniając się, że zachowasz jego orientację (od przodu do tylnego odcinka jelita) i rozciągnij je. Zwykle przedni odcinek jelita jest szerszy niż tylny odcinek. Zadbaj o to, aby podczas preparowania uzyskać całe jelito.
   nuta: Tylny koniec jest dość cienki i kruchy u małych ryb i może się odłamać, szczególnie u zwierząt <0,7 g.
5. Zwiń jelito na bibułę filtracyjną za pomocą pęsety, aby oderwać tkankę adhezyjną od jelita.
6. Przystąp do przygotowania jelita do różnych dalszych analiz

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Przekaźnik MS-222	Sigma Aldrich	E10521	proszek
10 kanałów PBS	Sigma Aldrich	Zobacz materiał P5493
Bibuła filtracyjna	Filtr-Laboratorium	RM14034252

powiedział: powiedział: