Iniekcja doprzewodowa: dostarczanie mieszanki iniekcyjnej do przewodów gruczołu sutkowego myszy

W tym artykule

Streszczenie

Źródło: Xiang, D., et al. Modelowanie raka piersi poprzez doprzewodowe wstrzyknięcie adenowirusa z ekspresją Cre do mysiego gruczołu sutkowego. J. Vis. Exp (2019).

Ten film opisuje technikę iniekcji wewnątrzprzewodowych, w której dostarczamy mieszankę iniekcyjną do przewodów mysich gruczołów sutkowych.

Protokół

1. Iniekcja wewnątrzprzewodowa

Stosuj techniki aseptyczne podczas całego zabiegu chirurgicznego.
Wykonaj nacięcie na skórze na długości ~1 cm między dwoma czwartymi pachwinowymi MG (ryc. 1). Ostrożnie oddziel płat skóry (z MG) od otrzewnej ciemieniowej, aby uwidocznić drzewo przewodowe sutka.
Ostrożnie przytrzymaj sutek kleszczami zegarmistrzowskimi i usuń zewnętrzną sutek bez przecinania pobliskiej skóry, używając nożyczek do mikropreparacji.
Załaduj ~3–5 μl mieszaniny iniekcyjnej Ad-Cre do strzykawki Hamilton o pojemności 25 μl z przymocowaną metalową igłą piasty 33 G. Oszacować objętość mieszaniny do wstrzykiwań w strzykawce na podstawie niebieskiego barwnika zawartego w mieszaninie.
nuta: Mniejszą objętość (np. 3 μl) należy stosować w przypadku wstrzykiwania do MG u samic w wieku 3–4 tygodni i większą objętość (np. 10 μl) w przypadku wstrzykiwania do MG samic w okresie laktacji.
Delikatnie przytrzymaj krawędź płata skóry delikatną, zakrzywioną pęsetą i powoli wstrzyknij mieszaninę do wstrzykiwań Ad-Cre do brodawki, w międzyczasie monitorując rozprzestrzenianie się niebieskiego barwnika w drzewie przewodowym sutka. Utrzymuj szybkość wtrysku na jak najniższym poziomie, aby uniknąć uszkodzenia prześwitu kanałowego.
nuta: Wstrzyknięty płyn (jak ilustruje dołączony niebieski barwnik bromofenolowy) rozprzestrzeniający się po całym drzewie przewodowym bez przeciekania do przedziału zrębu, wskazuje na udane wstrzyknięcie wewnątrzprzewodowe.
Delikatnie wyjąć igłę z brodawki, aby uniknąć wycieku wstrzykniętego płynu.
Zbadać dystalną stronę (tj. z dala od brodawki sutkowej) MG lub okolice wstrzykiwanego sutka. Należy zauważyć, że pęczniejący niebieski barwnik (tj. barwnik dyfundujący do pobliskiego zrębu) wskazuje na wstrzyknięcie poduszeczki tłuszczowej sutka, a nie na udane wstrzyknięcie doprzewodowe.
Zamknij rany chirurgiczne (od 1,2) w skórze za pomocą klipsów do ran.

2. Opieka pooperacyjna

Wyjmij mysz ze znieczulenia i umieść ją na poduszce grzewczej w czystej klatce w celu odzyskania sprawności.
Meloksykam należy podać ponownie podskórnie w dawce 5 mg/kg mc., 24 godziny po zabiegu.
Monitoruj ogólny stan zwierzęcia i szukaj oznak infekcji w miejscu nacięcia przez 5 dni.
Klipsy na rany usuwa się ~7-10 dni po zabiegu.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

figure-results-1
Rycina 1: Schemat ideowy wstrzyknięcia wewnątrzprzewodowego wirusa Ad-Cre do MG.(A) Miejsce nacięcia w linii środkowej między dwoma czwartymi MG. (B) Wstrzyknięcie doprzewodowe Ad-Cre z niebieskim barwnikiem (dla lepszej wizualizacji) do jednego z czwartych MG. (C) Zamknięcie nacięcia w skórze za pomocą klipsów do ran