Artykuł metodologiczny

Test immunofluorescencji CTC: technika charakteryzowania krążących komórek nowotworowych

30 kwietnia 2023

W tym artykule

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Garcia, J., et al. Semi-automatic PD-L1 Charakterystyka i liczenie krążących komórek nowotworowych od pacjentów z niedrobnokomórkowym rakiem płuc metodą immunofluorescencji.J. Vis. Exp.(2019 rok)

Ten film opisuje test immunofluorescencji krążących komórek nowotworowych (CTC), technikę charakteryzowania biomarkerów na krążących komórkach nowotworowych w próbkach pacjentów z niedrobnokomórkowym rakiem płuc. Test ten może być stosowany do monitorowania dynamicznych zmian guza i odpowiedzi immunologicznej, która może odzwierciedlać odpowiedź na chemioterapię, radioterapię i możliwe leczenie immunoterapeutyczne.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Barwienie immunofluorescencyjne

  1. Wyliczyć na szkiełku z komorą z siatką typu hemocytometr liczbę komórek na ml. Wzbogaconą próbkę rozcieńczyć 0,2% roztworem zapobiegającym wiązaniu (tabela materiałów) do stężenia osiągającego 100 000 komórek/100 μl na cytospinę.
  2. Zwilżyć kontur komory próbki bawełną (tabela materiałów) z 50 μl 0,2% roztworu zapobiegającego wiązaniu. Umieścić szkiełko ze szkła polilizynowego w komorze na próbkę i zamknąć.
  3. Pokryj końcówkę 0,2% roztworem zapobiegającym wiązaniu, pipetując w górę i w dół 3 razy. Ponownie zawiesić wzbogaconą próbkę i przenieść roztwór komórkowy do komory na....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Pluroniczny F-68 10% Gibco (firma Gibco) 24040-032Rozwiązanie zapobiegające wiązaniu. Warunki przechowywania: Temperatura pokojowa
EZ Cytolejki Rybak termicznyA78710003Komora na próbki z bawełny. Warunki przechowywania: Temperatura pokojowa
Wirówka Shandon Cytopsin4Rybak termiczny A78300003Dedykowana wirówka. Warunki przechowywania: Temperatura pokojowa
Paraformaldehyd 16%Rybak termiczny 11490570Roztwór do utrwalania. Warunki przechowywania: +4°C
Sól fizjologiczna buforowana fosforanami Ultra Pure Grade 1X – 1L1 Laboratorium BazaBUF-2040-1X1LWarunki przechowywania: Temperatura pokojowa
Agent blokujący FcR Miltenyi BiotecNumer katalogowy: 130-059-901Warunki przechowywania: +4°C
Przeciwciało monoklonalne PD-L1 (klon 29E2A3) - fikoerytrynaLegenda biologiczna BLE329706 Warunki przechowywania: +4°C
Przeciwciało monoklonalne PanCK (klon AE1/AE3) Alexa Fluor 488Rybak termiczny53-9003-80 Warunki przechowywania: +4°C
Przeciwciało monoklonalne CD45 (klon HI30) Alexa Fluor 647Legenda biologiczna BLE304020Warunki przechowywania: +4°C
Mocowanie fluorowe Sigma Zobacz materiał F4680Rozwiązanie montażowe. Warunki przechowywania: Temperatura pokojowa
szalka PetriegoHolenderNumer katalogowy: 632180Warunki przechowywania: Temperatura pokojowa
Sól fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS)Ozyme powiedział:BE17-512FWarunki przechowywania: +4°C
Szkiełka polilizynowe Rybak termicznyJ2800AMNZWarunki przechowywania: Temperatura pokojowa
Izolator krzemowy Grace bio-Labs Numer katalogowy: 664270Warunki przechowywania: Temperatura pokojowa
Sterylna woda dejonizowana – 100 ml1 Laboratorium Baza CUS-4100-100ml Warunki przechowywania: Temperatura pokojowa
Surowica cielęca płodu (FCS)Gibco (firma Gibco)Numer katalogowy: 10270-106Warunki przechowywania: +4°C
TGL

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Cytocentryfugacjamikroskopia fluorescencyjnacharakterystyka PD L1niedrobnokom rkowy rak p ucafiksacja kom rekznakowanie przeciwcia amip ukanie w PBSmedium monta owe

Powiązane artykuły