Podawanie dooskrzelowe: technika selektywnego podawania eksperymentalnego środka do płuc myszy

Streszczenie

Źródło: Liao, S. et al. Bezpośrednie podanie dooskrzelowe w celu poprawy selektywnego odkładania czynnika w płucach myszy. J. Vis. Exp. (2019).

Ten film opisuje podejście dooskrzelowe polegające na selektywnym podawaniu eksperymentalnego środka do dystalnego prawego i lewego płuca. W przedstawionym protokole będziemy podawać bleomycynę dooskrzelowo myszy, aby uzyskać lepszy model zwłóknienia płuc.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące zwierząt zostały sprawdzone przez lokalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz komisję weterynaryjną JoVE.

1. Nieoperacyjna intubacja IB i metody porodu

1. Podejście IB do selektywnej kaniulacji płatowej dystalnego prawego płuca
   1. Po wykonaniu kaniulacji dotchawiczej (IT) (użyj dominującej ręki, aby zaintubować przedłużony cewnik do tchawicy przez jamę ustną), obróć plastikową płytkę o +30° (ryc. 1A).
   2. Przytrzymaj piastę cewnika i prowadź go w sposób naturalny równolegle do linii środkowej myszy, rozciągając go na głębokość zależną od masy, jak opisano w tabeli 1.
      nuta: Należy zwrócić uwagę na opór na tych głębokościach. W tym momencie mysz stanie się lekko tachypneiczna, jak wyjaśniono w reprezentatywnych wynikach. Dla doświadczonego operatora około 90% prób pomyślnie kaniuluje prawe płuco (z odnotowanym przyspieszonym oddechem).
   3. Dostarczyć 20 μl 0,3% niebieskiego barwnika Evansa (EBD, patrz tabela materiałów) za pomocą końcówki ładującej żel.
   4. Dozuj 1–2 porcje (po 0,1 ml każdy) powietrza za pomocą szklanego zakraplacza.
      nuta: Zapewnia to usunięcie pozostałego roztworu EBD (lub środków eksperymentalnych) z wnętrza cewnika.
   5. Wyjmij cewnik, a następnie utrzymaj pozycję myszy przez 30 sekund.
   6. Połóż zwierzę na ocieplającym kocu, aż odzyska przytomność. Rekonwalescencja trwa zazwyczaj w ciągu 2 minut.
2. Podejście IB do selektywnej segmentowej kaniulacji dystalnego lewego płuca
   1. Po wykonaniu kaniulacji IT (użyj dominującej ręki do intubacji przedłużonego cewnika do tchawicy przez jamę ustną), obróć plastikową płytkę o -74° (ryc. 1B).
   2. Przytrzymaj piastę cewnika i delikatnie dociśnij, aby wsunąć cewnik do lewego oskrzela głównego pnia, jednocześnie wywierając umiarkowany nacisk zarówno w dół (90°), jak i w kierunku podnóżka. Na głębokościach podanych w tabeli 1 operator powinien zwrócić uwagę na opór, gdy dolne segmenty lewego płuca są zaangażowane. Jeśli wystąpi przyspieszony oddech, wycofaj cewnik do pozycji 20–25 mm i spróbuj ponownie.
   3. Po kaniulacji lewych dolnych segmentów płuc wymagana jest zmiana położenia, aby umożliwić grawitacyjne wspomaganie podawania środka. Obróć plastikową tablicę o -30° (Rysunek 1B).
   4. Dostarcz 40 μl 0,3% EBD za pomocą końcówki ładującej żel.
      nuta: Możliwe jest dostarczenie większej objętości środka, ponieważ lewe płuco ma tylko jeden płat
   .
   5. Dozować 1–2 porcje (0,1–0,3 ml każdy) powietrza za pomocą szklanych zakraplaczy.
      nuta: Zapewnia to usunięcie wszelkich pozostałości EBD (lub środków eksperymentalnych) z wnętrza cewnika.
   6. Wyjmij cewnik, a następnie utrzymaj pozycję myszy przez 30 sekund.
   7. Połóż zwierzę na ocieplającym kocu, aż odzyska przytomność. Rekonwalescencja trwa zazwyczaj w ciągu 2 minut.

Wyniki

Rycina 1: Podejście do selektywnej kaniulacji płata prawego/lewego płuca i podawania.(A) Aby celować w prawe płuco, plastikowa tablica jest obracana o +30°, co ułatwia selektywne angażowanie prawego oskrzela pnia głównego. Cewnik jest wysunięty (zgodnie z odległościami zaproponowanymi w tabeli 1) w celu selektywnego zazębieni...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Osłonięty cewnik dożylny 22 G	Bd	381423
Niebieski barwnik Evans	Sigma-Aldrich	E2129
LED-30W Światłowodowy podwójny oświetlacz mikroskopu na gęsiej szyi	AmScope	LED-30W
Igła Precisionglide, 18G x 1"	Bd	305195	Ścięta końcówka o długości 12 mm

powiedział: