Wiedza na temat mechanizmów molekularnych leżących u podstaw transdukcji smaku poczyniła ostatnio znaczne postępy, głównie dzięki wykorzystaniu modeli zwierzęcych. Jednakże szeroka rozpiętość czułości i specyficzności smakowej wśród ssaków uzasadnia prowadzenie badań na tkankach ludzkich. Opisujemy technikę biopsji służącą do pobierania żywych komórek smakowych z brodawek języka człowieka.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Technika pobierania brodawek grzybiastych (smakowych) z ludzkiego języka
* These authors contributed equally
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Zmysł smaku ma kluczowe znaczenie dla życia człowieka. Informuje on organizm o jakości pokarmu, który zostanie potencjalnie spożyty, i stymuluje procesy metaboliczne przygotowujące kanał pokarmowy do trawienia. Odnotowuje się stały postęp w zrozumieniu wczesnych zdarzeń biochemicznych i molekularnych leżących u podstaw transdukcji smaku (przegląd: Breslin i Spector, 20081). Jednak dotychczasowe postępy wynikały w dużej mierze z zastosowania modeli zwierzęcych. Ponieważ jednak wystnieją wyraźne różnice w specyficzności i gęstości receptorów między gatunkami, transdukcję smaku u ludzi można zrozumieć jedynie przy użyciu ludzkiej tkanki smakowej. W niniejszej pracy opisujemy technikę biopsji służącą do pobierania ludzkich brodawek nitkowatych, widocznych jako zaokrąglone, różowe struktury przednie o średnicy około 0.5 mm, zawierające pąki smakowe. Pobrane w ten sposób brodawki są wykorzystywane do wielu celów, w tym do izolacji żywych komórek pąków smakowych, hybrydyzacji in situ, immunohistochemii oraz – za pomocą technik biologii molekularnej – do identyfikacji nowych białek swoistych dla smaku.
Protokół
1. Wprowadzenie i uwagi ogólne
Ogólna procedura obejmuje miejscowe znieczulenie niewielkiego obszaru (1 cm2) grzbietowej powierzchni przedniej części języka, a następnie usunięcie określonej liczby (6-8) brodawek nitkowatych (smakowych) z tego znieczulonego obszaru przy użyciu zakrzywionych mikro-nożyczek sprężynowych (typ McPherson-Vannas #SR 5603, Roboz, Rockville, MD). Usunięte brodawki nitkowate mają objętość około 0,25 mm3 każda. Wraz z każdą brodawką usuwane jest bardzo mało niepapilarnej tkanki nabłonkowej (smakowej). Nowe brodawki formują się w tym obszarze po 3 do 5 tygodniach i odzyskują funkcjonalne pączki smakowe (Spielman i Brand, niepublikowane obserwacje). Po usunięciu tak niewielkiej ilości materiału smakowego nie występuje zauważalny wpływ na smak lub aromat potraw. Na podstawie badań, w których liczono poszczególne pączki smakowe w języku dorosłego człowieka, można oszacować, że ludzki język zawiera około 50 pączków smakowych. Nasza procedura usuwa maksymalnie 20 do 25 z tych pączków (średnio ~ 3,5 do 4 pączków smakowych na jedną brodawkę nitkowatą u człowieka)2, co stanowi około 0,4% całości. Ponadto chirurgiczna utrata tej tkanki nie wiąże się z bólem. Odczuwa się oczywiście jedynie lekki ból w miejscu wstrzyknięcia, podczas wprowadzania igły do języka. Po ustąpieniu znieczulenia sporadycznie występuje lekki dyskomfort trwający mniej niż dobę, lecz jest on znacznie mniejszy niż ten, którego doświadcza się po przypadkowym „przygryzieniu” języka.
W ciągu ostatnich kilku lat opracowaliśmy alternatywną procedurę, która nie obejmuje znieczulenia. Technika usuwania tkanek jest w obu przypadkach identyczna. Jedyną różnicą w procedurze jest to, że chirurg nie jest już ograniczony do obszaru o średnicy 1 cm2, w którym zastosowano znieczulenie. Zamiast tego może wybrać dowolne miejsce na grzbietowej powierzchni języka, gdzie widoczne są wyraźne brodawki. Całkowita liczba usuniętych brodawek jest ograniczona do 6-8 w obu technikach, znieczuleniem lub bez. Przy prawidłowym wykonaniu dyskomfort związany z usunięciem 6-8 brodawek smakowych grzybkowatych jest uważany za mniej istotny w porównaniu z bólem towarzyszącym podaniu znieczulenia miejscowego. Ogólna ankieta przeprowadzona wśród osób, które przeszły obie procedury, tj. ze znieczuleniem i bez znieczulenia, wykazała, że zdecydowana większość badanych zrezygnowałaby ze znieczulenia miejscowego przy wszystkich przyszłych biopsjach. Chirurg, który opracował tę technikę (AIS), oraz kilku współpracowników przeszkolonych przez autora, którzy wykonywali biopsje bez znieczulenia, wypróbowali ją na sobie i potwierdzają, że dyskomfort jest przejściowy i uznawany za mniejszy niż w przypadku ugryzienia się w język. Wreszcie, dziesiątki osób, które zgodziły się na biopsję, zostały zapytane, czy byłyby skłonne spróbować usunięcia jednej brodawki bez znieczulenia, a w przypadku uznania tego za zbyt bolesne, poddałyby się znieczuleniu; wszystkie one zgodziły się kontynuować usuwanie brodawek bez znieczulenia.
Cały zabieg biopsji nie powinien trwać dłużej niż 5-10 minut. W przypadku zastosowania znieczulenia czas ten wydłuża się o kolejne 2-3 minuty. Biopsję zazwyczaj przeprowadza się w godzinach porannych. Przed zabiegiem wolontariusze otrzymują instrukcję, aby zjeść lekki posiłek na dwie godziny przed planowanym rozpoczęciem. Przed biopsją pobierana jest pisemna świadoma zgoda. Kryteria wykluczenia w momencie biopsji obejmują osoby z poważnymi chorobami przewlekłymi, niezależnie od tego, czy są one kontrolowane farmakologicznie (np. jakiekolwiek choroby przewodu pokarmowego, choroby neurodegeneracyjne, nowotwory, dyskrazje krwi, alergia na środki znieczulające miejscowo itp.), osoby z tętnem powyżej 10 lub poniżej 60 uderzeń na minutę; skurczowym ciśnieniem krwi powyżej 145 lub poniżej 100 mmHg; rozkurczowym ciśnieniem krwi powyżej 90 lub poniżej 60 mmHg, a także decyzję chirurga o braku możliwości udziału badanego w badaniu.
Na koniec należy wziąć pod uwagę, że procedura biopsji powinna być przeprowadzana w tej samej placówce, w której tkanka zostanie poddana obróbce do badania, ponieważ integralność tkanki jest szybko tracona, co często odnotowywaliśmy na podstawie spadku jakości mRNA. Aby zminimalizować te problemy, tkankę języka należy przetworzyć tak szybko, jak to możliwe.
2. Przygotowanie obiektu
- Badany zostaje posadzony w fotelu stomatologicznym lub na siedzisku z zagłówkiem.
- W momencie wykonywania biopsji należy sprawdzić tętno oraz ciśnienie tętnicze krwi. Jeśli parametry badanego wykraczają poza zakres ciśnienia krwi, tętna lub sprawności jam ustnej, chirurg zaleca mu/jej niezwłoczne umówienie się na wizytę u lekarza.
- Należy zbadać jamę ustną pod kątem ogólnego stanu tkanek, zwracając uwagę na oznaki kserostomii, języka geograficznego lub wszelkie zmiany chorobowe języka. Wszyscy badani wykazujący objawy chorób jamy ustnej, w tym zmiany na języku lub kserostomię, zostają wykluczeni z badania. Należy poinstruować badanego, aby wypłukał usta wodą w celu usunięcia wszystkich zanieczyszczeń z jamy ustnej. W razie potrzeby język należy oczyścić jednorazową skrobaczką do języka, aby usunąć płytkę lub resztki, które mogłyby zostać wniesione do wnętrza języka podczas wstrzykiwania znieczulenia. Chirurg, używając sterylnych gazików i rękawiczek, przytrzymuje przednią ¼ języka wystającą z jamy ustnej.
- W przypadku zastosowania znieczulenia, za pomocą strzykawki tuberkulinowej o pojemności 1cc z igłą 28 gauge x ½' zawierającej 0,25 mL lidokainy (2%) z epinefryną (1:10 0), lek jest powoli wstrzykiwany w jedno miejsce tuż pod powierzchnią grzbietową przedniej części języka. Miejsce znieczulenia znajduje się dystalnie względem miejsca poboru próbki, aby uniknąć wpływu lidokainy na kolejne analizy. Dla porównania, ilość wstrzykniętej lidokainy (0,25 mL) stanowi około jednej czwartej dawki zazwyczaj stosowanej podczas blokady nerwów w zabiegach stomatologicznych (0,8 mL do 1 mL). Po wprowadzeniu igły, ale przed podaniem środka znieczulającego, wykonuje się aspirację, aby upewnić się, że nie przebito naczynia krwionośnego. Środek ostrożności ten jest stosowany mimo że anatomicznie mało prawdopodobne jest uszkodzenie dużego naczynia w pobliżu powierzchni grzbietowej. Jedynymi tętnicami na powierzchni grzbietowej są tętnice grzbietowe języka, które są małymi naczyniami krwionośnymi zlokalizowanymi głównie bardziej posterioralnie niż przednia jedna trzecia języka, gdzie odbywa się pobieranie tkanki. Większe tętnice językowe i żyły językowe przebiegają po powierzchni brzusznej języka, daleko od obszaru grzbietowego poddawanego znieczuleniu 3. Znieczulony obszar o wielkości 1 cm wydaje się być lekko blady w porównaniu z otaczającymi tkankami. Wynika to z obrzęku tkanki, który uciska małe naczynia krwionośne, a także z działania obkurczającego naczynia epinefryny. Po około jednej minucie za pomocą zgłębnika sprawdza się zniewieczanie tego obszaru. Jeśli obszar nie jest znieczulony, można podać drugą dawkę (0,1 do 0,2 mL).
3. Technika usuwania brodawek językowych
- Przednią ćwiartkę języka badanego owijamy w sterylną gazę (Rycina 1) i trzymamy w lewej ręce chirurga (jeśli biopsja wykonywana jest prawą ręką). Jeden róg gazy pozostawiamy wolny, aby chirurg mógł wytrzeć język ze śliny. Język musi być trzymany mocno, ale oczywiście w sposób, który nie powoduje niepotrzebnego dyskomfortu. Koniec palca wskazującego lewej ręki umieszcza się pod językiem, bezpośrednio pod miejscem, w którym wykonywana jest biopsja. Przez pchanie palca wskazującego do góry język zostaje rozciągnięty na koniuszku palca, co powoduje wystanie brodawek i ułatwia biopsję.
- Kryteria wyboru brodawek do biopsji: Brodawki smakowe są łatwo odróżnialne od otaczających je brodawek nitkowatych ze względu na ich kształt i rozmiar. Brodawki grzybkowate są okrągłe i w pewnym stopniu odizolowane od otoczenia. W ich bezpośrednim sąsiedztwie znajduje się kolisty obszar pozbawiony brodawek nitkowatych (Rycina 2A, niebieskie strzałki). Obszar ten ma średnicę około 1 mm. Inną cechą charakterystyczną brodawek grzybkowatych jest rozległa arboryzacja naczyń kapilarnych widoczna na szczycie większości brodawek grzybkowatych u młodych badanych. Chociaż arboryzacja ułatwia lokalizację brodawek grzybkowatych, niekoniecznie są one dobrymi wskaźnikami obecności pączków smakowych w danej brodawce. Zasadniczo pobieranie próbek rozpoczyna się od przedniej części i przesuwa dalej od koniuszka języka, aby uniknąć zakrycia miejsca kolejnego pobrania tkanki przez krwawienie kapilarne.
- Po zidentyfikowaniu odpowiedniej brodawki, do jej wycięcia używa się sprężynowych mikro-nożyczek (McPherson-Vannas, zakrzywione, ostra krawędź tnąca 5 mm, grzebieniowe, szerokość końcówki 0.2 mm, całkowita długość 3" (RS-5603, Roboz). Aby efektywnie korzystać z mikrochirurgicznych nożyczek, nie należy używać końcówki ostrza do cięcia; należy natomiast ciąć jak najgłębiej wewnątrz ostrza (Rycina 1, powiększony obraz oraz Rycina 3), blisko punktu przecięcia z przeciwległym ostrzem. Usunięcie brodawki odbywa się jednym ruchem tnącym nożyczek (Rycina 1). Im głębiej między otwartymi ostrzami znajduje się docelowa brodawka, tym cięcie jest skuteczniejsze. Należy zadbać o to, aby ogólna pozycja nożyczek była równoległa do powierzchni grzbietowej języka.
- Czasami język wysycha podczas gdy chirurg stara się zidentyfikować brodawkę do usunięcia. Po wyschnięciu zdolność operatora do wyraźnego dostrzeżenia, która brodawka jest grzybkowata, staje się utrudniona, a przesuwanie ostrzy po brodawce staje się bardzo trudne. Zbyt suchy język zazwyczaj powoduje przyleganie metalowego ostrza do języka, co sprawia, że precyzyjny ruch chirurgiczny jest trudniejszy do kontrolowania. Pozwolenie badanemu na zamknięcie ust i doprowadzenie śliny w kontakt z powierzchnią języka pomaga w tym procesie. Zbyt mokry język również nie jest korzystny. W tym procesie pomocne jest wykorzystanie rogu gazy służącej do trzymania języka.
- Wszelkie wystąpienie krwawienia kapilarnego jest leczone poprzez osuszanie sterylną gazą. Krwawienie zazwyczaj ustępuje w ciągu kilku minut i nie zakłóca dalszego pobierania tkanek. Ponieważ brodawki wystają ponad powierzchnię nabłonkową języka, a usuwane są tylko górne 3/4 brodawki grzybkowatej (Rycina 2B), części wykazującej obecność pączków smakowych, spodziewa się niewielkiego krwawienia.
- Za pomocą małej pęsety Dumont (typu Pattern), usunięte brodawki umieszcza się w schłodzonym podstawowym buforze Ringera (130 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 1 mM Na-Pyruvate, 20 mM HEPES-Na, pH 7.2; osmolalność ~ 305 mOsm) do dalszych manipulacji. Niezbędne jest, aby NIGDY nie ściskać brodawki między ramionami pęsety. Tkanka jest bardzo krucha i powinna być traktowana z niezwykłą ostrożnością.
- Po usunięciu brodawek badany pozostaje w fotelu przez dziesięć do piętnastu minut. Każdy badany otrzymuje polecenie, aby nie gryźć znieczulonego języka, lecz trzymać go w spoczynku. Badani powinni być monitorowani wizualnie przez prowadzącego chirurga. Oczekuje się, że znieczulenie ustąpi w ciągu około 30-60 minut. Ponieważ miejsce usunięcia brodawek może być lekko tkliwe po biopsji, badani są instruowani, aby unikać potraw ostrych lub gorących (temperaturowo), napojów gazowanych oraz napojów bardzo zimnych lub gorących. Badani są również informowani, że lekkie zaczerwienienie śliny jest normalne i ustąpi po rozpuszczeniu się skrzepu.
- Badani są przyjmowani 30-40 dni po usunięciu brodawek w celu oceny miejsca, z którego zostały usunięte. Do tego czasu brodawki smakowe powinny całkowicie się zregenerować.
5. Reprezentatywne wyniki
Zebrana tkanka może być wykorzystana do immunohistochemii, RT-PCR, hybrydyzacji in situ, obrazowania wapnia, techniki patch clamp oraz hodowli tkankowych. Przy prawidłowym wykonaniu papille wyglądają zdrowo, są białe i mają średnicę około 0,5-1 mm (Rysunek 2B).
Soseczki pobrane do immunohistochemii są przetwarzane zgodnie z istniejącymi i opublikowanymi protokołami 4. Typowy pączek smakowy z utrwalonej paraformaldehydem soszeczki smakowej przedstawiono na rysunku 4A.
Biopsje brodawek można również poddać obróbce enzymatycznej5 w celu uzyskania dysocjacji komórek pączków smakowych. Po dysocjacji enzymatycznej komórki mogą być przechowywane do 4 godzin w nawilżonej czaszce Petriego w temperaturze 4C. W tym stanie mogą być wykorzystane do PCR pojedynczych komórek (Rysunek 4B), obrazowania Ca-imaging itp.
Komórki wykazują różnorodne kształty, z czego wiele jest smukłych i bipolarnych (Rycina 5A i 5B), co jest typowe dla komórek kubka smakowego. Podczas pobierania komórek lub przeprowadzania obrazowania Ca, po około 20 minutach pod mikroskopem, w komórkach zaczynają pojawiać się pęcherzyki apoptotyczne (Rycina 6A i 6B, strzałki), a wiele z nich staje się okrągłych. Przy użyciu techniki opracowanej w naszym laboratorium, komórki były pobierane indywidualnie za pomocą pipety do patch-clamp, jak pokazano na Rycynie 5A i 5B.
Jak wspomniano powyżej, brodawki zaczynają odrastać po 5 do 8 tygodniach. Rycina 7A przedstawia wygląd języka, z którego lewej strony usunięto 8 brodawek grzybowych bez zastosowania znieczulenia. Widoczne są 8 niewielkich czerwonawych plamek w miejscach, w których odcięto brodawki. Po zabiegu nie stwierdzono krwawienia. Przedstawione zdjęcie wykonano 10 minut po biopsji. Rycina 7B przedstawia język tego samego ochotnika 40 dni po biopsji. Zauważalny jest odrost wszystkich brodawek. Aby ustalić, czy zregenerowane brodawki są funkcjonalne, poprosiliśmy ochotnika o zgodę na drugą biopsję obejmującą dokładnie te same brodawki. W celu prawidłowej identyfikacji odpowiednich brodawek do ponownego pobrania, wygenerowaliśmy siatkę (Rycina 7C) dopasowaną do 8 brodawek usuniętych pierwotnie i nałożyliśmy ją na język tego samego ochotnika 40 dni po pierwszej biopsji. Pomagając sobie konturem języka oraz odległością od brzegu do siatki, po ich zidentyfikowaniu usunęliśmy kilka dokładnie tych samych brodawek i poddaliśmy je analizie immunohistochemicznej. Rycina 4A przedstawia jedną z tych brodawek. Widoczny jest zarys pączka smakowego (na żółto) oraz barwienie immunopozytywne dla fosfolipazy Cβ2 (PLCβ2), enzymu związanego z transdukcją w komórkach smakowych typu 2. Dane te dowodzą, że przy zastosowaniu opisanej tutaj procedury biopsji, brodawki grzybowe regenerują się w stopniu wystarczającym w ciągu 40 dni, aby odtworzyć prawdopodobnie funkcjonalne pączki smakowe.
Rycina 1Przednia ćwiartka języka pacjenta zostaje owinięta w sterylną gazę i przytrzymana w lewej ręce chirurga. Język musi być trzymany mocno. Powiększony obraz po prawej stronie przedstawia prawidłowe ułożenie nożyczek oraz położenie brodawki względem ostrza.
Rysunek 2(A) Brodawki grzybiaste zaznaczono niebieskimi strzałkami. Są to struktury okrągłe, w pewnym stopniu odizolowane od otoczenia, a w ich bezpośrednim sąsiedztwie znajduje się kolisty obszar pozbawiony brodawek nitkowatych. (B) Brodawka smakowa grzybiaste na końcówce mikro-nożyczek sprężynowych kilka sekund po jej usunięciu.
Rysunek 3Samodzielna biopsja brodawki grzybowatej z użyciem lustra i bez znieczulenia. Wstawka ilustruje ogólną pozycję nożyczek, które muszą być ustawione równolegle do powierzchni grzbietowej języka. Jeśli zabieg zostanie przeprowadzony prawidłowo i w sposób nietraumatyczny, niemal wszyscy ochotnicy rezygnują ze znieczulenia.
Rycina 4 A. Immunohistochemia pączka smakowego. Brodawka nitkowata zwizualizowana za pomocą optyki Nomarskiego z wykorzystaniem przeciwciał przeciwko fosfolipazie β2 i znakowaniem białkiem fluorescencyjnym RFP (Red Fluorescent Protein). Obrys pączka smakowego oraz kilka oznakowanych komórek smakowych zaznaczono na żółto.
B. RT-PCR kandydującego receptora smaku kwaśnego, kanału jonowego aktywnego w odpowiedzi na kwasy 1 (ASIC1). M= marker. Ścieżki od 1 do 4 przedstawiają RT-PCR pojedynczych komórek dla ASIC1 od czterech różnych ochotników. Po pobraniu brodawki grzybiaste zostały rozdzielone enzymatycznie, wyizolowano poszczególne komórki, a następnie przeprowadzono analizę ekspresji ASIC1. Na ścieżkach 2 i 4 stwierdzono prawidłową ekspresję ASIC1.
Rysunek 5A. Obraz pojedynczych komórek smakowych pobieranych za pomocą pipety patch-clamp. W lewym dolnym rogu widoczna jest duża komórka nabłonkowa (5A). Nad pipetą patch-clamp i za szklanym korpusem widoczne są również dwa erytrocyty. Komórka smakowa ma około 30–50 mikronów długości i około 6 mikronów szerokości. Dla odniesienia, erytrocyt ma około 7–8 mikronów średnicy. B. przedstawia inną komórkę receptora smakowego otoczoną przez cztery komórki nabłonkowe. Obraz komórki smakowej jest wyraźny.
Rycina 6A. Obrazy komórek, w których zaczęły pojawiać się pęcherzyki apoptotyczne (przypominające duchy okrągłe pęcherzyki przyczepione do komórki smakowej, strzałki). B. Komórki nie są już zbierane, gdy ich wygląd ulega zmianie, jak pokazano tutaj.
Rycina 7A. Dziesięć minut po usunięciu 8 brodawek smakowych bez zastosowania znieczulenia. Miejsca operacyjne są widoczne jako lekko zaczerwienione punkty. Nie stwierdzono krwawienia.
B. Ten sam język 40 dni po biopsji. Zauważono regenerację wszystkich brodawek. Aby pomóc w identyfikacji odrośniętych brodawek w miejscu usunięcia, stworzono siatkę na zdjęciu po prawej stronie, którą następnie nałożono na zregenerowane brodawki na obrazie po lewej stronie.
C. Zregenerowane brodawki pojawiły się w dokładnie tym samym miejscu. Ponowne pobranie brodawek z tej grupy, a następnie przeprowadzenie badania immunohistochemicznego, wykazało, że zregenerowane brodawki zawierały funkcjonalne komórki smakowe (patrz ryc. 4A).
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Istotną zaletą wykorzystania ludzkich komórek jest ich specyficzność. Opisana tutaj szczegółowo procedura pozwala na pozyskanie tkanki języka w celu izolacji komórek receptorowych smaku u ludzi. Komórki smakowe te mogą być wykorzystywane w badaniach molekularnych, mających na celu odkrycie cząsteczek ważnych dla transdukcji informacji smakowej, a także w badaniach obrazowania wapnia, które monitorują aktywność komórek smakowych w odpowiedzi na bodźce. Dodatkowo, tkanka języka pozyskana za pomocą tej procedury może być an...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Brak zadeklarowanych konfliktów interesów.
Podziękowania
Praca ta była wspierana przez NIH R21 DC03969-01 (dla JGB). Dziękujemy dr. Fritzowi Lischce za wyizolowanie pojedynczych komórek pączków smakowych, dr. Tauf Huque za przeprowadzenie RT-PCR przedstawionego na rysunku 4B oraz panu D. Bayleyowi i pani S. Alarcon za pomoc techniczną. M. Yanina Pepino jest stypendystką wspieraną przez NIDAT32 DA07313 Washington University School of Medicine, St. Louis, MO (Cottler, L.B. PI).
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| McPherson-Vannas. Zakrzywiona, ostra krawędź tnąca 5mm. Grzebień, szerokość końcówki 0,2 mm, całkowita długość 3" | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5603, Roboz | |
| Mała pęseta Dumonta | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-4915, Roboz |
Bibliografia
- Breslin, P. A., Spector, A. C. Mammalian taste perception. Curr Biol. 26 (4), R148-R155 (2008).
- Miller, I. Anatomy of the peripheral taste system. Handbook of Olfaction and Gustation. Doty, R. I., Dekker, M. , Marcel Dekker. New York. 521-547 (1995).
- Figure 12.67. Gray's Anatomy: The Anatomical Basis of Medicine and Surgery. , 38th Edition, Churchill Livingstone. New York. (1995).
- Huque, T., Cowart, B. J., Dankulich-Nagrudny, L., Pribitkin, E. A., Bayley, D. L., Spielman, A., Feldman, I., S, R., Mackler, Sour ageusia in two individuals implicates ion channels of the ASIC and PKD families in human sour taste perception at the anterior tongue. PLoS One. 4 (10), e7347-e7347 (2009).
- MacDonald, J. F., Mody, I., Salter, M. W., Spielman, A. I. Patch-clamping of taste cells in mouse. Experimental Cell Biology of Taste and Olfaction. Spielman, A. I., Brand, J. G. , CRC Press. Boca Raton, FL. 329-332 (1995).
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
