Niniejszy film opisuje metodę oczyszczania Wolbachia pipientis z linii komórkowej Anopheles gambiae, a następnie hodowli tego endosymbionta w medium bezkomórkowym. Przedstawiono również test żywotności bakterii.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Utrzymywanie Wolbachia w medium bezkomórkowym
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
W niniejszym protokole wideo zaprezentowano procedury pozwalające na (1) oczyszczenie symbiontów Wolbachia z hodowli komórek komarów, (2) zastosowanie testu fluorescencyjnego w celu oceny żywotności oczyszczonych Wolbachia oraz (3) utrzymanie pozyskanych zewnątrzkomórkowych Wolbachia w medium wolnym od komórek. Oczyszczone Wolbachia pozostają żywe w fazie zewnątrzkomórkowej, lecz nie replikują się do momentu ponownego inokulowania do komórek eukariotycznych. Wolbachia zewnątrzkomórkowe oczyszczone w ten sposób zachowują żywotność przez co najmniej tydzień w temperaturze pokojowej, a być może dłużej. Oczyszczone Wolbachia nadają się do mikroiniekcji, ekstrakcji DNA oraz innych zastosowań.
Oświadczenia
Autorzy nie mają żadnych konfliktów interesów do ujawnienia.
Przedruki i uprawnienia
