Izolacja bakteryjnych pęcherzyków zewnątrzkomórkowych za pomocą chromatografii wykluczającej wielkość

Streszczenie

Źródło: Watson, D. C., et al. Skalowalna izolacja i oczyszczanie pęcherzyków zewnątrzkomórkowych z Escherichia coli i innych bakterii. J. Vis. Exp. (2021)

Ten film pokazuje zastosowanie chromatografii wykluczania wielkości z porowatymi kulkami żywicy do izolowania bakteryjnych pęcherzyków zewnątrzkomórkowych (EV) z filtratu kultury bakteryjnej. Większe EV eluują się wcześnie, omijając pory żywicy, podczas gdy mniejsze białka dostają się do porów i wymywają później.

Protokół

1. Chromatografia wykluczająca według wielkości (SEC)
NUTA: SEC stosuje się w celu zwiększenia czystości pęcherzyków zewnątrzkomórkowych (EV) i usunięcia białka niepęcherzykowego.

1. Użyj małej kolumny SEC (objętość złoża 10 ml) do izolacji EV od <100 ml materiału wyjściowego i większej kolumny (objętość złoża 47 ml) do izolacji EV od >100 ml materiału wyjściowego.
   NUTA: W poniższym przykładzie zostaną wyświetlone woluminy dla większej kolumny, z woluminami dla mniejszej kolumny w nawiasach.
2. Doprowadź kolumnę SEC i sól fizjologiczną buforowaną fosforanami (PBS) do temperatury pokojowej przez kilka godzin. Ustabil....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
qEV oryginalny, 35 nm	Izon powiedział:		Maksymalna objętość załadunku 0,5 ml
Stojak qEV	Izon powiedział:		Do użytku z oryginalnymi kolumnami SEC qEV
qEV-2, 35 nm	Izon powiedział:		Maksymalna objętość załadunku 2 ml
Białko LoBind, 2,0 mL, czyste probówki do PCR	Eppendorf powiedział:	30108450