Zachowanie rojowe Pseudomonas aeruginosa pod wpływem stresu antybiotykowego

Streszczenie

Źródło: Bru, J., et al., Obrazowanie poklatkowe rojów bakteryjnych i zbiorowa reakcja na stres. J. Vis. Exp. (2020)

Ten film przedstawia procedurę analizy zachowania roju Pseudomonas aeruginosa poprzez obserwację wzrostu bakterii z centralnej hodowli w kierunku plam satelitarnych zawierających tę samą kulturę zmieszaną z antybiotykiem, przy użyciu zestawu płytki agarowej i obrazowania poklatkowego.

Protokół

1. Wzrost P. aeruginosa i warunki posiewu

1. Przygotuj 400 ml bulionu lizogenicznego (LB), dodając 10 g mieszanki proszku LB-Miller do 400 ml ddH₂O. Dodaj dodatkowe 8 g agaru na 2% LB-agarowe szalki Petriego. Autoklaw do sterylizacji.
2. Wlej 20 ml stopionej pożywki LB-agarowej do szalek Petriego o średnicy 10 cm i pozwól im zestalić się w temperaturze pokojowej przez noc. Przechowywać płynne podłoże w temperaturze pokojowej, a płytki agarowe w temperaturze 4 °C.
3. Smugi P. aeruginosa na szalce Petriego LB-agar z zamrożonego bulionu przechowywanego w temperaturze -80 °C za pomocą sterylnych pęte....

Wyniki

Rycina 1: Schemat testu roju P. aeruginosa i zbiorowej reakcji na stres. (A) Komórki P. aeruginosa są hodowane przez noc (16–18 godzin do OD₆₀₀ około 1,5) w bulioni.......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Odczynniki
Agar baktowy, odwodniony	BD Difco	214010	Do płytki LB-agar i płytki agarowej do roju
Kasaminokwasy	BD Difco	223050	Do roju mediów
D-glukoza	Fisher Chemiczny	Zobacz materiał D16500	Dekstroza. Do roju mediów
Sól disodowa fosfomycyny	Przemysł chemiczny w Tokio	F0889 powiedział:	Stężenie magazynowe: 200 mg / ml. Rozpuszczony w ddH₂O
Siarczan gentamycyny	Sigma-Aldrich	G1914 powiedział:	Stężenie zapasowe: 3 mg / ml. Rozpuszczony w ddH₂O
Siarczan kanamycyny	Sigma-Aldrich	60615	Stężenie magazynowe: 100 mg / ml. Rozpuszczony w ddH₂O
LB-Młynarz	BD Difco	244620	Do bulionu LB i płytek agarowych LB
Siarczan magnezu siedmiowodny	Sigma-Aldrich	230391	Do roju mediów
Szczepów
Pseudomonas aeruginosa	Laboratorium Siryaporn	AFS27E.118	Szczep PA14
Dostaw
Papier ścierny z tlenku glinu	3 mln	150 Grzywna	Do czarnych pokryw
tkanina	Joann	PRD7089	tkanina
farba w sprayu	Krylon	5592 matowy	Do czarnych pokryw
Kolba Erlenmeyera	Kimax (Kimax)	26500	250 ml
Szklane butelki do przechowywania	Pyrex	13951L	250 ml, 500 ml, 1000 ml
8-calowe opaski zaciskowe	Giętarka Gardnera	E173770	Do mocowania czarnej matowej tkaniny
Szalki Petriego (100 mm x 15 mm)	Rybak	FB0875712	Płyty styropianowe 100 x 15 mm
Drewniane patyczki	Rybak	23-400-102	Do smug i zaszczepiania bakterii
Sprzęt
Autoklaw	Rynek Kuźnia Przemysłowa	Jednostka STM-E	Do sterylizacji odczynników
Pipeta 25 ml	Stany Zjednoczone Naukowe, Inc.	1072-5410	Do pipetowania 20 ml do rojenia płytek agarowych
Osuszacz	Frigidaire	FAD704DWD 70 litrów	Do utrzymania wilgotności względnej w pomieszczeniu na poziomie około 45%
Inkubator	Firma VWR	89032-092	Do rozwoju bakterii w temperaturze 37 °C
Kąpiel wodna Isotemp	Rybak	15-462-21Q	Do chłodzenia mediów do 55 °C
Okap z przepływem laminarnym	Firma Baker	SG603A	Do suszenia talerzy
Pibuła P-20	Gilson	F123601	Plamienie na rojących się płytkach agarowych
Kontroler pipet	Marka Tech	Dysza akumulatorowa	Do pipetowania 20 ml do rojenia płytek agarowych