Ten film pokazuje przygotowanie genetycznie zmodyfikowanej kultury Borrelia burgdorferi zmodyfikowanej z uśpionym DNA bakteriofaga przenoszącym gen oporności na antybiotyki. Po selekcji i inkubacji antybiotyków induktor chemiczny wyzwala uszkodzenie DNA, prowadząc do wycięcia, replikacji i złożenia nowych wirionów zawierających gen oporności. Po drugim odwirowaniu i ponownym zawieszeniu komórki bakteryjne zawierające dojrzałe cząstki wirusa są gotowe do dalszych zastosowań.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Przygotowanie i indukcja kultur Borrelia burgdorferi do produkcji cząstek wirusa
762 wyświetleń
⸱
26 września 2025
W tym artykule
Streszczenie
Protokół
1. Przygotowanie kultury B. burgdorferi do produkcji φBB-1
- Przygotuj pożywkę Barbour-Stoenner-Kelly uzupełnioną 6,6% inaktywowaną termicznie normalną surowicą króliczą (BSK). Na 1 l 1x BSK połączyć składniki wymienione w tabeli 1 w 900 ml wody, dostosować pH do 7,6 za pomocą 1 N wodorotlenku sodu i powoli mieszać w temperaturze 4 °C przez 2-4 godziny. Po zakończeniu mieszania sprawdź i w razie potrzeby ponownie dostosuj pH do 7,6 i zwiększ objętość do 1 l wodą. Wysterylizuj pożywkę, przepuszczając przez filtr 0,22 μM (patrz tabela materiałów) i użyj świeżej lub przechowuj w temperaturze....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Jednostki filtracyjne 1 l (PES, wielkość porów 0,22 μm) | Millipore Sigma | S2GPU10RE | |
| Rurka 12 mm x 75 mm (nasadka dwupozycyjna) (polipropylen) | USA Naukowe | 1450-0810 | mieści 4 ml o małej objętości pustek (do indukcji) |
| Stożkowe probówki wirówkowe 15 ml (polipropylen) | USA Naukowe | 5618-8271 | |
| 1-metylo-3-nitrozo-nitroguanidyna (MNNG) | Millipore Sigma | UWAGA: potencjalny czynnik rakotwórczy; nie są już łatwo dostępne, nie testowały oferowanego substytutu | |
| Pipety Pasteura 5,75" (z zatyczką bawełnianą/szkło borokrzemianowe/niesterylne) | Thermo Fisher Naukowy | 13-678-8A | autoklaw przed użyciem |
| Stożkowe probówki wirówkowe 50 ml (polipropylen) | USA Naukowe | 1500-1211 | |
| Alkohol etylowy | |||
| Bacto Neopepton | Gibco (firma Gibco) | DF0119-17-9 | |
| Bacto TC Drożdżaki | Gibco (firma Gibco) | 255772 | |
| Albumina surowicy bydlęcej (stopień wymiany surowicy) | Produkty biologiczne Gemini | Zobacz materiał 700-104P | |
| CMRL-1066 bez L-Glutaminy (proszek) | Biologiczny w USA | Zobacz materiał C5900-01 | Klasa hodowli komórkowej |
| Erytromycyna | Produkty badawcze International Corp | E57000-25.0 | |
| Roztwór odczynnika gentamycyny | Gibco (firma Gibco) | 15750-060 | |
| Glukoza (dekstroza bezwodna) | Thermo Fisher Naukowy | Zobacz materiał BP350-500 | |
| HEPESY | Thermo Fisher Naukowy | Zobacz materiał BP310-500 | |
| Siarczan kanamycyny | Thermo Fisher Naukowy | 25389-94-0 | |
| Millex-GS (wielkość porów 0,22 μM) | Millipore Sigma | SLGSM33SS | do filtrowania, sterylizacji antybiotyków i innych roztworów o małej objętości |
| Mitomicyna C | Thermo Fisher Naukowy | BP25312 | UWAGA: potencjalny czynnik rakotwórczy; Stosować tylko w dygestorium chemicznym |
| N-acetylo-D-glukozamina | MP Biomedicals, LLC | 100068 | |
| szalka Petriego (100 mm × 15 mm) | Thermo Fisher Naukowy | FB0875712 | |
| Surowica królika niesterylna śladowo hemolizowana młode (NRS) | Pel-Freez Biologicals | 31119-3 | Dezaktywacja termiczna zgodnie z instrukcjami producenta |
| Wodorowęglan sodu | Thermo Fisher Naukowy | Zobacz materiał BP328-500 | |
| Pirogronian sodu | Millipore Sigma | Zobacz materiał P8674-25G | |
| Roztwór siarczanu streptomycyny | Millipore Sigma | S6501-50G | |
| Cytrynian trisodowy dwuwodny | Millipore Sigma | S1804-500G | cytrynian sodu dla BSK |
