W tym filmie bakterie redukujące siarczyny są hodowane w pożywce agarowej zawierającej siarczyny, gdzie rosną beztlenowo i redukują siarczyn do siarkowodoru, tworząc czarne osady z jonami żelaza. Czarne kolonie są izolowane z głębokości agaru przy użyciu technik aseptycznych i przenoszone do świeżej pożywki w celu kontynuacji inkubacji beztlenowej.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Hodowla bakterii beztlenowych redukujących siarczyny z kultury agarowej
925 wyświetleń
⸱
26 września 2025
W tym artykule
Streszczenie
Protokół
UWAGA: Clostridium perfringens jest uważany za organizm o poziomie zagrożenia bezpieczeństwa biologicznego 2 (BSL2). Chociaż nie wszystkie próbki żywności będą zawierały C. perfringens, wszystkie próbki hodowlane powinny być traktowane jako takie. Przez cały czas należy nosić wszystkie odpowiednie środki ostrożności i środki ochrony osobistej (PPE). Odkaż cały materiał przed utylizacją.
1. Przygotuj zmodyfikowany RPM (Rapid perfringens medium)
- Połączyć 30 g/l płynnego tioglikolanu, 60 g/l żelatyny, 5 g/l peptonu, 5 g/l glukozy, 5 g/l dwuzasadowego fosforanu potasu, 3 g/l ekstraktu drożdżowego, 1,5 g/l chlorku sodu, 0,5 g/l siarczanu żelazawe....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Rysunek 1: Schemat techniki kanapkowej z agarem TSC.
Pożywki RPM zawierające bakterie C. perfringens są umieszczane między dwiema warstwami agaru TSC w celu promowania środowiska beztlenowego.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| D-cykloseryna | Sigma-Aldrich | Zobacz materiał C6880 | |
| Dekstroza | Sigma Nauki przyrodnicze | D9434-250G | |
| Jednorazowe pipety transferowe | dowolna marka | Wybierz taki z wąską końcówką, taki jak jednorazowe pipety transferowe Thermo Scientific 137116M/EMD | |
| Zestawy do badania krwi i tkanek DNeasy | Qiagen powiedział: | 69504 | Uwaga: oceniono liczne zestawy do ekstrakcji DNA i plazmidu, ten zestaw dał najbardziej pożądane wyniki. |
| Suchy inkubator | dowolna marka | ||
| Płynne podłoże tioglikolanowe | Remel | R453452 | |
| Żelatyna ze skóry świni | Sigma Nauki przyrodnicze | G1890-500G | |
| Siarczan żelaza (II) siedmiowodny | Sigma Nauki przyrodnicze | F8633-250 G | |
| Lizozym z białka jaja kurzego | Sigma-Aldrich | L6876 | Potrzebny do ekstrakcji DNA, brak w zestawie |
| Parafilm lub folia plastikowa | dowolna marka | ||
| Pepton z kazeiny i innych białek zwierzęcych | Sigma-Aldrich | 70173-100G | |
| Baza agarowa Perfringens (TSC + SFP) | Oxoid (Oxoid) | CM0587 powiedział: | Zrób agar TSC zgodnie z instrukcją |
| Fosforan potasu dwuzasadowy | Sigma-Aldrich | Zobacz materiał P2222-100G | |
| Chlorek sodu | Sigma-Aldrich | S-7653 | |
| Sterylny skrobak do komórek | dowolna marka | ||
| Rozsiewacz komórek sterylnych | dowolna marka | ||
| Sterylne szalki Petriego | dowolna marka | ||
| Ekstrakt drożdżowy | Sigma-Aldrich | 70161-100G |
