Przygotowanie kultury Salmonella typhimurium

Streszczenie

Źródło: Gutiérrez, S., i wsp., Izolacja fagosomów zawierających Salmonella typhimurium z makrofagów. J. Vis. Exp. (2017)

Ten film pokazuje hodowlę i przygotowanie Salmonella typhimurium w celu uzyskania czystej, metabolicznie aktywnej zawiesiny bakteryjnej nadającej się do użytku eksperymentalnego.

Protokół

Wszystkie etapy związane z wykorzystaniem chorobotwórczej Salmonella typhimurium muszą być przeprowadzone w obiekcie o BSL-2 (poziom bezpieczeństwa biologicznego 2) lub wyższym poziomie bezpieczeństwa biologicznego.

1. Hodowla Salmonella typhimurium

1. Inokulować Salmonella typhimurium (szczep SL1344) z pojedynczej kolonii bakteryjnej do 5 ml bulionu z naparu z serca (BHI) za pomocą pętli bakteryjnej.
2. Zawiesinę bakteryjną inkubować w inkubatorze w temperaturze 37 °C przez noc, wytrząsając.
3. Następnego dnia przenieść 1 ml zawiesiny bakteryjnej do 19 ml bulionu BHI w kolbie stożkowej i inkubować w temperaturze 37 °C w inkubatorze z wytrząsaniem.
4. Monitorować wzrost S. typhimurium , mierząc gęstość optyczną (OD) przy 600 nm (OD₆₀₀) za pomocą spektrofotometru. Pomiary należy wykonywać co około 30 minut.
5. Gdy OD₆₀₀ osiągnie 1,0, usuń zawiesinę bakteryjną z inkubatora i przenieś ją do probówki o pojemności 50 ml. Odwirować bakterie przy 5 400 x g przez 15 minut w temperaturze 4 °C.
6. Usunąć supernatant i ponownie zawiesić w 10 ml sterylnego roztworu soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS).
7. Wirować przy 5 400 x g przez 15 minut w temperaturze 4 °C.
8. Usunąć supernatant i ponownie zawiesić bakterie w 4,9 ml sterylnego PBS.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
MgCl₂ powiedział:	Carla Rotha	A537.4
Sacharoza	Carla Rotha	4621.1
Mannitol	Carla Rotha	4175.1
Spektrofotometr SmartSpec 3000	Bio-Rad	170-2501
Pętla bakteryjna (10μl)	Sarstedt powiedział:	86.1562.010
Salmonella enterica serowar Typhimurium Zobacz materiał SL1344	Instytut Leibniza DSMZ-Niemiecka kolekcja mikroorganizmów i kultur komórkowych
PBS (sól fizjologiczna buforowana fosforanami)	Powłoka Biochrom	L1825