Przygotowanie hodowli Streptococcus mitis do badań interakcji gospodarz-patogen

Streszczenie

Źródło: Naji, A., et al. Badanie stresu oksydacyjnego wywołanego przez paciorkowce z grupy Mitis u Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019).

Ten film przedstawia metodę hodowli Streptococcus mitis w warunkach mikroaerofilnych przy użyciu ekstraktu drożdżowego Todda-Hewitta lub pożywki agarowej THY w celu przygotowania kultur bakteryjnych do badań interakcji gospodarz-patogen.

Protokół

1. Przygotowanie paciorkowców z grupy Mitis do zakażenia

1. Na agarze THY (ekstrakt drożdżowy Todda-Hewitta) o wymiarach 100 mm x 15 mm należy usunąć pożądane szczepy paciorkowców (jeśli płytki były przechowywane w temperaturze 4 °C, należy je wstępnie ogrzać do 37 °C przed nałożeniem smug odpowiednich szczepów), a następnie inkubować płytki w temperaturze 37 °C przez noc (~18 godzin) w słoiku ze świecą, zapewniając mikroaerofilne środowisko do wzrostu paciorkowców (płytki z prążkami można przechowywać przez tydzień w temperaturze 4 ° C).
2. Aby rozmnażać kliniczne izolaty paciorkowców, użyj tryptycznego agaru z krwią sojową. Inkubować płytki w temperaturze 37 °C w słoiku ze świecą przez noc (~18 h).
3. Następnego dnia wyjmij płytki ze słoika ze świecą i zbierz izolowane kolonie za pomocą sterylnej pętli. Zaszczepić 15 ml sterylnych stożkowych probówek zawierających 2 ml bulionu THY. Aby rozmnażać kliniczne izolaty paciorkowców, należy uzupełnić bulion THY o 5% v/v krwi owczej. Zamknąć szczelnie nakrętki i inkubować probówki w temperaturze 37 °C w warunkach statycznych.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
BD Bacto Todd Hewitt Rosół	Fisher Naukowy	DF0492-17-6
Ekstrakt drożdżowy	Fisher Naukowy	Zobacz materiał BP1422-500
Jednorazowe pipety serologiczne z polistyrenu 10 ml	Fisher Naukowy	07-200-574
Jednorazowe pipety serologiczne z polistyrenu 25 ml	Fisher Naukowy	07-200-575
Bakteriologiczne szalki Petriego Falcon z pokrywką (35 mm x 10 mm)	Fisher Naukowy	08-757-100A
Szalka Petriego z przezroczystą pokrywką (60 mm x 15 mm)	Fisher Naukowy	FB0875713A
Szalki Petriego z przezroczystą pokrywką (100 mm x 15 mm)	Fisher Naukowy	FB0875712
S. mitis ATCC 49456 (Zobacz materiał ATCC) 49456
Agar