Hodowla Haemophilus influenzae bez typu

Streszczenie

Źródło: Venuprasad, K. i wsp., Dotchawicze podawanie Haemophilus influenzae w modelach mysich w celu zbadania zapalenia dróg oddechowych. J. Vis. Exp. (2016)

Ten film pokazuje hodowlę nietypizowanych Haemophilus influenzae i przygotowanie inokulum o standaryzowanej dawce do dalszych badań kolonizacyjnych lub infekcji.

Protokół

1. Hodowla nietypizowanych Haemophilus influenzae (NTHi) i przygotowanie inokulum

1. Umieść NTHi na płycie z agarem czekoladowym i trzymaj płytkę do góry nogami w nawilżanym inkubatorze CO₂ przez noc w temperaturze 37 °C i 5% CO₂ . Następnego dnia posadź bakterie w bulionie z naparu do serca mózgu. Następnie dodaj 1 ml bulionu do sterylnej probówki o pojemności 1,5 ml.
2. Wirować przy 4 000 x g przez 5 minut w temperaturze pokojowej. Następnie odrzucić supernatant i ponownie zawiesić osad w 1 ml sterylnego 1x soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS). Powtórz ten krok raz.
3. Przenieść 100 μl ponownie zawieszonego roztworu do 900 μl 1x PBS i zmierzyć absorbancję rozcieńczonej kultury przy długości fali 600 nm w spektrofotometrze.
4. Określić żywotność i jednostki tworzące kolonie (CFU) inokulum poprzez hodowlę seryjnych rozcieńczeń w stosunku 1:10 na płytkach agarowych z czekoladą i inkubację przez noc w temperaturze 37 °C i 5% CO₂ .
5. Opierając się na żywotności i jtk określonych w poprzednim kroku, dostosować inokulum do końcowego stężenia 20 x 10⁶ jtk/ml.

Materiały