Ruchliwość ślizgowa we włóknach Phormidium lacuna

Streszczenie

Źródło: Weber, N., et al., Naturalna transformacja, ekspresja białek i kriokonserwacja nitkowatego Cyanobacterium Phormidium lacuna. J. Vis. Exp. (2022)

Ten film przedstawia procedurę oceny ruchliwości ślizgu w Phormidium lacuna poprzez homogenizację kultur włókien w celu uzyskania jednolitej zawiesiny, przygotowanie zestawu do testu na płytce Petriego na szkiełku mikroskopowym i wizualizację ruchu filamentu.

Protokół

1. Test na przemieszczanie się w ciekłym podłożu
   1. W celu bezpośredniej obserwacji ruchliwości należy przenieść 8 ml pożywki zawierającej P. lacuna na 6-centymetrową szalkę Petriego. Odczekaj kilka minut, aż próbka osiągnie temperaturę pokojową, a następnie przykryj szalkę Petriego folią celofanową.
   2. Umieść szkiełko mikroskopowe na stole x-y standardowego mikroskopu z kamerą. Włącz światło mikroskopu. Najlepiej zawsze używać tych samych ustawień elektrycznych i optycznych dla oświetlenia. Przesuń obiektyw 4x lub 10x w kierunku światła.
   3. Umieść szalkę Petriego na szkiełku. Dostosuj pojedyncze filamenty lub wiązki filamentów za pomocą ruchów x, y i z tabeli.
      NUTA: Ze względu na trójwymiarowy układ tylko część odpowiedniego przekroju może być ostra. Folia celofanowa umożliwia regulację ostrości bez ograniczeń.
   4. Obserwuj ruchy pojedynczych włókien lub wiązek. Upewnij się, że soczewka obiektywu nie dotyka cieczy. Rejestruj ruchy włókien za pomocą standardowej kamery mikroskopowej.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Wyroby szklane, różne
Mikroskop DM750	Zeiss
Kamera okularowa MikrOkular Full HD	Bresser powiedział:		do nagrań poklatkowych, sprzężony z minikomputerem Raspberry Pi
szalki Petriego polistyren, 60 mm x 15 mm	Merck	P5481-500EA
Oprogramowanie, adres URL
ObrazJ		oprogramowanie do przetwarzania obrazów (intensywność pikseli, średnica okręgu)
Pożywki hodowlane
Sztuczna woda morska	0,41 M NaCl, 53 mM MgCl₂, 28 mM Na₂SO₄, 10 mM CaCl₂, 9 mM KCl , 2,4 mM NaHCO₃ ,0,84 mM KBr, 0,49 mM H3BO₃, 90 μM SrCl₂, 72 μM NaF
f/2 -płynne medium	sztuczna woda morska, 0,1 % (v/v) roztwór pierwiastków śladowych, 0,05 % (v/v) roztwór witamin, 0,88 mM NaNO₃, 36 μM NaH₂PO₄
Roztwór pierwiastków śladowych	0,36 mM NaH₂PO₄, 12 μM Na₂EDTA, 39 nM CuSO₄, 26 nM Na₂MoO₄ , 77 nM ZnSO₄, 42 nM CoCl₂, 0,91 μM MnCl₂
Roztwór witaminowy	0,3 μM tiamino-HCl, 2,1 nM biotyny, 0,37 nM cyjanokobalamina