Analizy histologiczne i hematologiczne mające na celu ocenę skutków Bacillus subtilis u szczurów poddanych stresowi cieplnemu

Streszczenie

Źródło: Sorokulova, I., i in. Zapobieganie niepożądanym skutkom stresu cieplnego u szczurów przez szczep Bacillus subtilis. J. Vis. Exp. (2016)

Ten film przedstawia analizy histologiczne i mikroskopii krwi służące do oceny ochronnych efektów Bacillus subtilis u szczurów narażonych na stres cieplny.

Protokół

1. Analiza histologiczna

1. Pobieranie próbek jelita cienkiego od każdego eksperymentalnego szczura metodą chirurgiczną. Utrwalić próbki w utrwalaczu Bouina, zatopić w parafinie, przygotować przekroje o długości 6 μm i barwić fragmenty hematoksyliną i eozyną przy użyciu standardowych procedur.
2. Do pomiaru wysokości kosmki jelitowej oraz całkowitej grubości błony śluzowej w każdej próbce używaj systemu mikroskopu o wysokiej rozdzielczości (powiększenie 100X). Przeanalizuj 4 próbki od każdego szczura i wykonaj co najmniej dwadzieścia pomiarów w każdej próbce. Ekspresowe wyniki w mikrometrach.

2. Mikroskopia świetlna krwi o wysokiej rozdzielczości

1. Użyj platformy izolacyjnej drgań jako bazy dla systemu mikroskopu oraz kamery wideo i komputera do rejestrowania obrazów na żywo. Kalibruj zdjęcia testowe za pomocą slajdu Richardsona.
2. Umieść 7 μl świeżo pobranej krwi z każdego szczura na szklanym szkiełku, okładce, sfotografuj i zapisz dziesięć klatek obrazu o rozmiarze 72 × 53,3 μm² w każdej próbce (powiększenie 1 700X).
3. Mierz stężenie pęcherzyków za pomocą oprogramowania, które zapewnia wysokorozdzielcze obrazy optyczne w czasie rzeczywistym. Przeanalizuj co najmniej 20 klatek obrazu dla każdego warunku eksperymentalnego.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Fosforanowa sól fizjologiczna (PBS)	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	P4417
Fiksator Bouina	Nauki o mikroskopii elektronowej, Hatfield, PA, USA	15990
Slajd testowy Richardsona	Nauka o mikroskopii elektronowej, Hatfield, PA, USA	80303
Kamera Sony DXC-33	Sony
System optyczny mikroskopu świetlnego	CitoViva Technology Inc., Auburn, AL
Oprogramowanie Image-Pro Plus	Media Cybernetics, MD, USA