Przygotowanie płytki mikrofluidycznej z komórkami bakteryjnymi

W tym artykule

Streszczenie

Źródło: Sutlief, A. L. i in. Analiza naprężeń ścinających na żywych komórkach na Pseudomonas aeruginosa z wykorzystaniem zautomatyzowanego systemu mikrofluidycznego o wyższej przepustowości. J. Vis. Exp. (2019).

Ten film prezentuje przygotowanie płytki mikrofluidycznej do badań naprężeń ścinających w kulturach bakteryjnych. Po przygotowaniu kanałów podłożem, komórki bakteryjne są wprowadzane do kanału eksperymentalnego i inkubowane do przyczepienia. Pozostałe nośniki i hodowla są usuwane, aby przygotować system do kolejnych eksperymentów z naprężeniami ścinającymi.

Protokół

1. Przygotowanie medialne

Przygotuj minimalne medium (MM) z 0,25% glukozy. Aby uzyskać 1 L MM z 0,25% glukozy, dodaj 200 mL bezpłodnego roztworu soli M9, 2 mL bezpłodnego 1 M siarczanu magnezu (MgSO₄), 100 μL sterylnego 1 M chlorku wapnia (CaCl₂) oraz 12,5 mL bezpłodnej 20% glukozy (w/v) do wody (dH₂O) przy końcowej objętości 1 L.
Wymagane medium przeniesiono do sterylnej butelki za pomocą technik sterylnych. Przygotuj wymaganą ilość w zależności od liczby wykorzystywanych kanałów. Zazwyczaj każdy kanał wymaga 200 μL na zasiew, 300 μL na zasiew, a 1300 μL na eksperyment 24-godzinny.
Umieść butelkę w inkubatorze l....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Rysunek 1: Poszczególne elementy układu mikrofluidycznego. Poszczególne elementy są wymienione od lewej do prawej: 1. Kamera CCD, 2. Mikroskop odwrócony o wysokiej rozdzielczości z automatycznym stopniem, automatycznym modułem fluorescencji.......