Test ruchliwości do porównywania szczepów Vibrio cholerae z użyciem chlorku trifenyltetrazolu

Streszczenie

Źródło: Brumfield, K. D. i in. Techniki laboratoryjne stosowane do utrzymania i rozróżniania biotypów Vibrio cholerae Izolat kliniczne i środowiskowe. J. Vis. Exp. (2017)

Ten film pokazuje miękki test agarowy z użyciem chlorku triphenyltetrazolu do oceny i porównania ruchliwości szczepów Vibrio cholerae poprzez wizualizację aktywności metabolycznej poprzez formowanie się strefy czerwonej wokół aktywnie migrujących komórek.

Protokół

1. Badanie ruchliwości
   1. Przygotuj nocne hodowle szczepów Vibrio cholerae w płynnym bulionie LB (Luria-Bertani).
   2. Pellet 1,8 mL hodowli nocnej przez 2 minuty przez wirowanie (≥8 600 x g) w sterylnej rurce mikrowirówki o pojemności 2 mL i usuwa supernatant za pomocą pipety. Ponownie zawiesij pellet komórkowy w 1,8 mL 1x PBS (fosforanowa buforowana sól fizjologiczna) poprzez pipetowanie.
   3. Powtórz procedurę mycia trzy razy, a następnie ostateczne ponowne zawieszenie w 1,8 mL 1x PBS.
   4. Inokuluj płytki agarowe o ruchowości, wkładając do wymytej kultury płynnej nacięcie i wbijając pionowo w medium. Między każdym szczepieniem sterylizuj druty za pomocą palnika Bunsena, a podczas kłucia agaru upewnij się, że klin szczepiący się nie wygina, ponieważ może to wpłynąć na wyniki.
   5. Inkubuj płytki pokrywką do góry przez 14 do 24 godzin w temperaturze 37 °C. Po 14 godzinach dokładnie monitoruj płytki ruchliwości, aby zapobiec nadmiernemu rozwojowi hodowli.

Materiały