Precyzyjna i wysokoprzepustowa analiza wzrostu bakterii z użyciem czytnika mikropłyt

Streszczenie

Źródło: Kurokawa, M. i inni. Precyzyjna, wysokoprzepustowa analiza wzrostu bakterii. J. Vis. Exp. (2017)

Ten film demonstruje wysokoprzepustowe ilościowe określenie wzrostu bakterii za pomocą czytnika mikropłyt. Opisuje etapy związane z przygotowaniem kultury, pomiarem gęstości optycznej oraz analizą dynamiki wzrostu.

Protokół

1. Rejestrowanie wzrostu w czasie rzeczywistym
   1. Narysuj piktogram płyty z 96 dołkami (tabela 8 × 12), aby wskazać położenie zaszczepionych próbek hodowli na płycie 96-dołowej. Wydrukuj tabelę i użyj jej jako odniesienia do eksperymentu.
      NUTA: Studnie umieszczone na krawędziach mikropłyty powinny zawierać wyłącznie puste medium ze względu na parowanie.
   2. Umieść sterylizowaną mikropłytkę z płaskim dnem z 96 dołkami i pokrywką, końcówki pipety P-1000, 1000-μL, końcówki pipety P-200, 200-μL, kilka mikrorurek 1,5 mL, pipetę wielokanałową 8-kanałową, zbiornik odczynnika sterylnego, M63 w temperaturze pokojowej....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Fosforan dipotasa	Wako	164-04295
Fosforan monopotasu	Wako	166-04255
Siarczan amonu	Wako	019-03435
Heptahydrat siarczanu magnezu	Wako	138-00415
Tiamina-HCl	Wako	201-00852
Glukoza	Wako	049-31165
Hcl	Wako	080-01066
Heptahydrat siarczana żelaza (II)	Wako	094-01082
KOH	Wako	168-21815
Glicerol	Wako	075-00611
Końcówki pipety, 200 μL	WATSON	110-705Y
Końcówki pipety, 1 000 μL	WATSON	110-8040
Mikrorurka (1,5 mL)	WATSON	131-715C
8 pipet wielokanałowych	WATSON	NT-8200
Mieszadło pasorina	JAKO JEDNO	2-4990-02
Cylinder szklany (200 mL)	JAKO JEDNO	1-8562-07
Precyzyjny miernik pH	JAKO JEDNO	AS800 / 1-054-01
Pipetman P-200	GILSON	1-6855-05
Pipetman P-1000	GILSON	1-6855-06
Stojak mikrorur	BM Bio	801-02Y
Wir	BM Bio	BM-V1
Mikropłytka Corning Costar z 96 dołkami i pokrywką (płaskie dno, przezroczysta)	Sigma-Aldrich	Corning, 3370
Rezerwuar odczynnikowy Corning Costar (50 mL)	Sigma-Aldrich	Corning, 4870
EPOCH2	BioTek	2014-EP2-002 / EPOCH2T
BIO clean bench	Panasonic	MCV-B131F
Szczepy bakteryjne	Organizacja banku napięcia; Narodowy Projekt Zasobów Biologicznych (NBRP) w Japonii