Bioluminescencja zakażeń bakteryjnych u myszy

Streszczenie

Źródło: de Vries, C. R. i in., A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection. J. Vis. Exp. (2020).

Ten film demonstruje bioluminescencyjną technikę obrazowania monitorującego postęp infekcji bakteryjnej na żywym modelu myszy. Bakterie patogenne opracowane z systemem raportu luxABCDE emitują światło w miejscu zakażenia, umożliwiając wizualizację bakterii aktywnych przemianownie. Obrazując mysz w czasie, naukowcy mogą nieinwazyjnie śledzić dynamikę infekcji i ilościowo określać intensywność sygnału bioluminescencyjnego.

Protokół

1. Przygotowanie i wzrost bakterii

1. Przeprowadz całą pracę z P. aeruginosa i zwierzętami z zachowaniem środków ostrożności BSL-2 zgodnie z wytycznymi instytucjonalnego komitetu ds. biobezpieczeństwa oraz komisji ds. wykorzystania zwierząt badacz. Wszystkie opisane tutaj kroki dotyczące P. aeruginosa, w tym szczepienie myszy, wykonuj w szafce z zabezpieczeniem biologicznym.
2. Luminescencyjny szczep PAO1:lux P. aeruginosa jest dostępny w naszym laboratorium na życzenie. Streak PAO1, przechowywany jako mrożony bulion glicerolowy, na agarze Lysogeny Bulion (LB). Dla luminescencyjnego szczepu PAO1:lux agar LB powinien zawierać selektywne an....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Zastrzyk chlorku sodu 0,9%	Hospira	2484457
18 G x 1 sterylna igła	BD	305195
25 g x 1 1/5 sterylna igła	BD	305127
Wymaz alkoholowy	BD	326895
Oprogramowanie obrazowania Aura	Obrazowanie za pomocą instrumentów spektralnych	Nie ma
Betadyna	Purdue Frederick Company	19-065534
LABORATORIUM Buprenorfiny SR	Zoopharm	Nie ma
Męce myszy C57BL/6J	Laboratorium Jacksona	664
Jednorazowy cios do biopsji, 6 mm	Integra	33-36
Nożyczki drobne - węglik wolframu	Narzędzia Nauki Ścisłej	14568-09
Suchy sterylizator szklanych kulek	Aparat Harvarda	61-0183
Granulowany agar	BioReagenty Fishera	BP9744
Poduszka grzewcza	Milliard	804879481218
Strzykawka insulinowa z igłą 28 G	BD	329461
System obrazowania Lago X	Obrazowanie za pomocą instrumentów spektralnych	Nie ma
Bulion LB	BioReagenty Fishera	BP1426
Strzykawka Leur-Lok 1 mL	BD	309628
Mini Arco Animal Trymer	Wahl Professional	919152
Balsam do usuwania owłosienia Nair z olejkiem dla niemowląt	Church i Dwight	Nie ma	Dostępne w każdej aptece
Ośmiokątne Kleszcze	Narzędzia Nauki Ścisłej	11041-08
Szalka Petriego	Falcon	351029
Fosforanowa sól fizjologiczna (PBS) 1x	Corning	21-040-CV
Folia spożywcza do prasowania i uszczelniania	Cieszę się.	Nie ma
Strzykawka SafetyGlide Insulin z igłą 30 g	BD	305934
Strzykawka insulinowa Safetyglide, 1/2 mL, 30 G x 5/16 TW	BD	305934
Skala	Ohaus Scout Pro	SP202
Suplement suplementacji	Henry Schein Zdrowie Zwierząt	29908
Tegaderm, 6 cm x 7 cm	3M	1624W