Iniekcja do otrzewnewki bakteryjnego lipopolisacharydu u myszy w celu badania ogólnoustrojowych odpowiedzi immunologicznych

Streszczenie

Źródło: Radulovic, K. i in. Wstrzykiwanie lipopolisacharydu u myszy w celu naśladowania wejścia produktów pochodzących od mikroorganizmów po przełamaniu bariery jelitowej. J. Vis. Exp. (2018)

Ten film pokazuje krok po kroku procedurę wstrzykiwania lipopolisacharydu (LPS) myszom wewnątrzotrzewnowkowo, aby wywołać stany ogólnoustrojowe.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały przeanalizowane przez lokalny instytucjonalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz komisję weterynaryjną JoVE.

1. Iniekcja lipopolisacharydów (LPS) do myszy
   1. Aspiruj roztwór roboczy LPS w strzykawce o pojemności 0,5 mL z igłą 30 G w laminarnym przepływie powietrza.
   2. Zważ samice myszy C57Bl/6 (w wieku od sześciu do 10 tygodni) i oblicz ilość LPS, która zostanie wstrzyknięta: 10 μL (2 μg)/g masy ciała.
      UWAGA: Na przykład, jeśli mysz waży 20 g, należy wstrzyknąć 20 g x 10 μL = 200 μL roztworu roboczego LPS.
   3. Delikatnie, ale stanowczo trzymaj mysz i unieruchom zwierzę jedną ręką. Upewnij się, że zwierzę może oddychać normalnie, ale nie skręca się podczas unieruchamiania.
   4. Przechyl lekko nos myszy w stronę podłogi, aby odsłonić brzuch do wstrzyknięcia. Zlokalizuj linię środkową brzucha, a miejsce wstrzyknięcia w dolnej części brzucha, po lewej lub prawej stronie od linii środkowej. Wstrzyknięcie soli fizjologicznej z buforem fosforanowym (PBS) wewnątrzotrzewnowo (i.p.) zamiast LPS do myszy kontrolnych.
   5. Wolną ręką wstrzyknij odpowiednią objętość (objętość obliczoną w kroku 1.2) roztworu roboczego LPS. Upewnij się, że igła weszła do jamy otrzewnej, ponieważ w przeciwnym razie mogą wystąpić błędne zastrzyki w warstwę mięśni brzucha. Mimo to nie wbijaj igły zbyt głęboko w jamę otrzewną, aby uniknąć urazu narządów wewnętrznych znajdujących się w tym obszarze.
   6. Ostrożnie odłóż zwierzę do klatki, do 5 myszy w klatce.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
LPS Escherichia coli O111:B4	Invivogen, San Diego, CA, USA.	tlrl-eblps
Omnican 50 Jednorazowa strzykawka insulinowa	B. Braun Melsungen, Melsungen, Niemcy	9151125