Przygotowanie hodowli gronkowca aureusa hemolitycznego do badań interakcji gospodarz z patogenem

W tym artykule

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Behera, R.K. i in., Metoda oparta na fluorescencji na badaniu regulacji genów bakteryjnych w tkankach zakażonych. J. Vis. Exp. (2019)

Ten film prezentuje przygotowanie hemolitycznych hodowli gronkowca aureus , aby standaryzować wzrost bakterii i osiągnąć synchronizację metaboliczną w badaniach interakcji gospodarz-patogen.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Przygotowanie szczepionki bakteryjnej
1. Szczepy Streak Staphylococcus aureus interesujące do izolacji na płytkach agaru krwi z zamrożonego bulionu glicerolowego. Inkubuj w temperaturze 37 °C przez 16–24 godziny, aby potwierdzić fenotypy hemolityczne na podstawie ich zdolności do lizy czerwonych krwinek (RBC) i tworzenia przezroczystych stref.
2. Inicjuj nocne hodowle, inokulując pojedyncze kolonie każdego szczepu do 4 mL tryptycznego bulionu sojowego (TSB) w sterylnych szklanych tubkach. Obróć rury w temperaturze 37 °C przez 16–24 godziny na rolce ustawionej pod kątem około 70° i 70 obrotów na minutę (RPM).
3. Użyj spektrofotometru, aby zmierzyć gęstość optyczną na 600 nm (OD₆₀₀) hodowli od etapu 2.1.2. Użyj sterylnego medium jako odniesienia optycznego (blank). Rozcieńcz te komórki do OD₆₀₀ 0,05 w 25 mL sterylnego tryptycznego bulionu sojowego (TSB) w oddzielnych, 125 mL kolbach DeLong (stosunek kolby do objętości) i inkubuj posiewki w kąpieli wodnej (dla prawidłowego przekazywania ciepła do hodowli), potrząsając przy 280 obr./min i ustaw do 37 °C.
  UWAGA: Wzrost inokulum może przebiegać na różne sposoby; Przedstawiono jedną z metod hodowli komórek do fazy wykładniczej. Niezależnie od tego, ważne jest, aby konsekwentnie stosować tę samą metodę przygotowania komórek do szczepienia.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa

Firma

Numer katalogowy

Komentarze

5% krwi owczej

Hardy Diagnostics (Santa Maria, CA)

A10

Orbitalna wstrząsana kąpiel wodna

New Brunswick Innova

Tryptyczny bulion sojowy

VWR

90000-376

Spektrofotometr widoczny w promieniach UV

Beckman Coulter-DU350

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Powiązane artykuły