Przygotowanie hodowli gronkowca aureusa hemolitycznego do badań interakcji gospodarz z patogenem

Streszczenie

Źródło: Behera, R.K. i in., Metoda oparta na fluorescencji na badaniu regulacji genów bakteryjnych w tkankach zakażonych. J. Vis. Exp. (2019)

Ten film prezentuje przygotowanie hemolitycznych hodowli gronkowca aureus , aby standaryzować wzrost bakterii i osiągnąć synchronizację metaboliczną w badaniach interakcji gospodarz-patogen.

Protokół

1. Przygotowanie szczepionki bakteryjnej
   1. Szczepy Streak Staphylococcus aureus interesujące do izolacji na płytkach agaru krwi z zamrożonego bulionu glicerolowego. Inkubuj w temperaturze 37 °C przez 16–24 godziny, aby potwierdzić fenotypy hemolityczne na podstawie ich zdolności do lizy czerwonych krwinek (RBC) i tworzenia przezroczystych stref.
   2. Inicjuj nocne hodowle, inokulując pojedyncze kolonie każdego szczepu do 4 mL tryptycznego bulionu sojowego (TSB) w sterylnych szklanych tubkach. Obróć rury w temperaturze 37 °C przez 16–24 godziny na rolce ustawionej pod kątem około 70° i 70 obrotów na minutę (RPM).
   3. Użyj spektrofotometru, aby zmierzyć gęstość optyczną na 600 nm (OD₆₀₀) hodowli od etapu 2.1.2. Użyj sterylnego medium jako odniesienia optycznego (blank). Rozcieńcz te komórki do OD₆₀₀ 0,05 w 25 mL sterylnego tryptycznego bulionu sojowego (TSB) w oddzielnych, 125 mL kolbach DeLong (stosunek kolby do objętości) i inkubuj posiewki w kąpieli wodnej (dla prawidłowego przekazywania ciepła do hodowli), potrząsając przy 280 obr./min i ustaw do 37 °C.
      UWAGA: Wzrost inokulum może przebiegać na różne sposoby; Przedstawiono jedną z metod hodowli komórek do fazy wykładniczej. Niezależnie od tego, ważne jest, aby konsekwentnie stosować tę samą metodę przygotowania komórek do szczepienia.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
5% krwi owczej	Hardy Diagnostics (Santa Maria, CA)	A10
Orbitalna wstrząsana kąpiel wodna	New Brunswick Innova	NA
Tryptyczny bulion sojowy	VWR	90000-376
Spektrofotometr widoczny w promieniach UV	Beckman Coulter-DU350	NA