Wykonywanie chromatografii cienkowarstwowej w celu oceny degradacji egzopolisacharydów bakterii

Streszczenie

Źródło: Hu, Y. i inni. Analiza interakcji między endobiotyką a ludzką mikrobiotą jelitową z wykorzystaniem systemów fermentacji w kąpielach in vitro. J. Vis. Exp. (2019)

Ten film demonstruje zastosowanie chromatografii cienkowarstwowej (TLC) do oceny degradacji egzopolisacharydów (EPS) przez ludzką mikrobiotę kałową. Fragmenty EPS w supernatantach fermentacyjnych są rozdzielane na podstawie rozmiaru i polaryzacji za pomocą TLC, a następnie wizualizowane jako kolorowe pasy po barwieniu specyficznym dla węglowodanów.

Protokół

1. Degradacja egzopolisacharydów (EPS) przez ludzką mikrobiotę kałową

1. Załaduj 0,2 μL fermentowanych supernatantów na wcześniej powlekane płyty aluminiowe do cienkowarstwowej chromatografii krzemionkowej-60, a następnie susz suszarką do włosów.
2. Wywołaj płytki w 20 ml roztworu kwasu mrówkowego/n-butanolu/wody (6:4:1, v:v:v) i susz suszarką do włosów.
3. Mocz płytki w odczynniku orcynolu, aby się zabarwić, a następnie wysusz suszarką do włosów.
   1. Przygotuj odczynniki orcynolowe, rozpuszczając 900 mg licznolu w 25 mL wody destylowanej, a następnie dodając 375 mL etanolu. W rezultacie skoncentrowany kwas siarkowy należy stopniowo dodawać i roztwór dokładnie wymieszać.
4. Podgrzewaj talerze w temperaturze 120 °C przez 3 minuty w piekarniku i oceniaj degradację EPS, mierząc pasma TLC.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Piekarnik do pieczenia	Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd	DHG-9240A	Używaj do podgrzewania i pieczenia
Etanol	Sigma-Aldrich	E7023	Użyj do przygotowania witaminy K1
Kwas mrówkowy	Sigma-Aldrich	399388	Wykorzystywane do pielęgnacji
Lichenol	Solarbio	C8380	Użyj do przygotowania kolorowej płyty
n-Butanol	ChemSpider	71-36-3	Wykorzystywane do pielęgnacji
Orcinol	Sigma-Aldrich	447420	Wykorzystywane do przygotowywania odczynników orcynolu
Kwas siarkowy	Sigma-Aldrich	150692	Wykorzystywane do przygotowywania odczynników orcynolu
Blachy aluminiowe TLC	MerckMillipore	116835	Wykorzystywane do pielęgnacji