Badanie aktywności mikroorganizmów jelitowych na egzopolisacharydach

Streszczenie

Źródło: Hu, Y. et.al., Analiza interakcji między endobiotyką a ludzką mikrobiotą jelitową z wykorzystaniem systemów fermentacji w kąpielach in vitro. J. Vis. Exp. (2019)

Ten film pokazuje analizę produkcji krótkołańcuchowych kwasów tłuszczowych przez ludzką mikrobiotę jelitową w odpowiedzi na egzopolisacharydy. Podkreśla ono separację i ilościową identyfikację produktów fermentacji mikroorganizmów za pomocą chromatografii gazowej. Wyniki pokazują, że egzopolisacharydy modulują metabolity mikrobiologiczne, które wpływają na dynamikę gospodarz z patogenem w jelitach.

Protokół

1. Wpływ egzopolisacharydu (EPS) na produkcję krótkołańcuchowych kwasów tłuszczowych (SCFA) przez ludzką mikrobiotę jelitową
   1. Dodaj fermentowane supernatanty (1 mL) przygotowane w rurkach wirówek o pojemności 5,3 do 2 mL.
   2. Dodaj 0,2 mL 25% (w/v) kwasu metafosforowego do każdej próbki i dokładnie wymieszaj roztwory przez wirowanie.
   3. Wiruj mieszanki w stężeniu 13 000 x g przez 20 minut, a następnie przelej supernatanty do świeżych rurek.
   4. Jednocześnie przygotowuj roztwory kwasu octowego, propionowego, maślowego, izobutyrowego, walerynowego i izovalerowego o stężeniu 120 mM kwasów octowych, propionowych, iz....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Filtry membranowe 0,22 μm	Millipore	SLGP033RB	Zastosowanie do filtrowania próbek
Sito 0,4 mm	Thermo Fischer	308080-99-1	Używanie do przygotowania próbek kału z ludzi
Octowy	Sigma-Aldrich	71251	Standardowa próbka dla SCFA
Butyrski	Sigma-Aldrich	19215	Standardowa próbka dla SCFA
Kolumna kapilarna	SHIMADZU-GL	InertCap FFAP (0,25 mm × 30 m × 0,25 μm)	Przyzwyczajone do wykrywania SCFA
Chromatografia gazowa	Shimadzu Corporation	GC-2010 Plus	Przyzwyczajone do wykrywania SCFA
Izobutyric	Sigma-Aldrich	46935-U	Standardowa próbka dla SCFA
Kwasy izovalerowe	Sigma-Aldrich	129542	Standardowa próbka dla SCFA
Kwas metafosforowy	Sigma-Aldrich	B7350	Standardowa próbka dla SCFA
NaOH	Sigma-Aldrich	30620	Podstawowy roztwór stosowany do regulacji pH buforów
Propioniczny	Sigma-Aldrich	94425	Standardowa próbka dla SCFA
Valeric	Sigma-Aldrich	75054	Standardowa próbka dla SCFA