Monitorowanie kolonizacji bakteryjnej korzeni Arabidopsis thaliana w bezglebowym systemie

W tym artykule

Streszczenie

Źródło: Harris, S. L. i in. Monitorowanie kolonizacji bakteryjnej i utrzymania korzeni Arabidopsis thaliana w pływającym systemie hydroponicznym. J. Vis. Exp. (2019)

Ten film prezentuje protokół monitorowania kolonizacji bakterii związanych z korzeniami na sadzonkach Arabidopsis thaliana uprawianych w systemie bezglebowym. Po kolonizacji bakterie są usuwane przez sonikację, następnie rozcieńczane, pokładane i inkubowane, tworząc kolonie odzwierciedlające przywiązanie i żywotność bakterii.

Protokół

Zbieranie bakterii do liczenia żywotnych komórek

UWAGA: Liczbę bakterii na korzeń sadzonki można określić w dowolnym momencie inkubacji. Kolonizację można monitorować w godzinach od 0 do 18 godzin, natomiast utrzymanie od 18 godzin wzwyż.

Usuń siewki z siatki (Rysunek 1, krok 5). Delikatnie umieść kleszcze sterylizowane ogniem pod liśćmi (ale po stronie liściowej siatki) i lekko uszczypnij łodygę. Przesuń siewki w górę i z dala od siatki, aby usunąć korzeń bez łamania. Jeśli korzeń się złamie, delikatnie zeskrobaj dno siatki, aby zebrać całą długość.
Usuń bakterie z korzeni roślin. Przenieś bakterie do dołków z płytką 24-dołkową zawierającą 1 mL_ddH200. Sonikuj próbki.
Ilościowo określ bakterie na korzeniach.
1. Wykonaj seriowe 10-krotne rozcieńczenia sonikowanych próbek do ^10-6 stopnia rozcieńczenia w ośrodku wzrostu bakterii. Dodaj 50 μL każdej rozcieńczonej dawki na pojedyncze płytki agarowe i rozsmaruj sterylnymi szklanymi kulkami. Inkubuj płytki w optymalnej temperaturze dla bakterii, aż pojedyncze kolonie będą liczalne.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Rysunek 1: Test kolonizacji i utrzymania bakterii na korzeniach A. thaliana . Sadzonki A. thaliana hodowane na sterylnej plastikowej siatce zostały przeniesione do podłoża zoptymalizowanego pod kątem bakterii [tutaj, 0,1 LB (Luria...