Donosowa infekcja myszy wirusem herpes myszy w celu oceny odpowiedzi immunologicznej gospodarza

Streszczenie

Źródło: Zhang, J., et al. P. Dissecting Innate Immune Signaling in Viral Evasion of Cytokine Production. J. Vis. Exp. (2014)

W niniejszym filmie zaprezentowano podanie donosowe herpeswirusa mysiego u myszy w celu wywołania swoistej dla płuc odpowiedzi immunologicznej. Następnie tkanka płuc jest przetwarzana w celu uzyskania nadsączów zawierających cytokiny do dalszej oceny odpowiedzi immunologicznej gospodarza.

Protokół

Wszystkie procedury z wykorzystaniem modeli zwierzęcych zostały zatwierdzone przez lokalny instytucjonalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz radę weterynaryjną JoVE.

1. Wydzielanie cytokin metodą ELISA u myszy zainfekowanych γHV68

1. Zanurz w narkozie myszy z jednego miotu szczepu C57BL/6 (B6) w wieku 6-8 tygodni, dopasowane pod względem płci (8-12 myszy na grupę), poprzez dożylne wstrzyknięcie 1,5 mg ketaminy/0,12 mg ksylazyny, a następnie inokuluj donosowo 40 PFU (jednostek tworzących plaki) γHV68 w 40 µl. W różnych punktach czasowych po zakażeniu uśmierć myszy poprzez inhalację CO₂ z następującym zwichnięciem stawów szyjnych.
2. Otwórz klatkę piersiową, wykonując cięcie boczne od lewej strony wzdłuż mostka, i przetnij żebra ostrymi nożyczkami. Pobierz tkankę płuc.
3. Przenieś połowę tkanki płucnej (lewy płat) do sterylnych probówek z nakrętką o pojemności 1,5 ml zawierających 500 µl kulek cyrkonowo-krzemionkowych o średnicy 1,0 mm. Do probówki dodaj 1 ml zimnej pożywki DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) bez surowicy i homogenizuj tkankę płucną za pomocą homogenizatora kulkowego przez 30 s. Schłodź probówki na lodzie przez 2 min i powtórz ten proces raz.
4. Wiruj probówki (15 000 x g przez 10 min) w temperaturze 4 °C, zbierz nadsącz i zmierz produkcję cytokin zgodnie z poniższym opisem.
5. Zmierz poziom cytokin, korzystając z komercyjnie dostępnych zestawów ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) do oznaczania cytokin, zgodnie z instrukcjami producenta.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Zestaw ELISA dla mysiego CCL5	R&D Systems	DY478
Kuleczki cyrkonowe/krzemionkowe 1.0 mm	BioSpec Products	11079110z