Artykuł metodologiczny

Oczyszczanie plazmidowego DNA z kolonii bakteryjnych przy użyciu zestawu Qiagen Miniprep Kit

36.4K wyświetleń

DOI:

10.3791/247

29 lipca 2007

W tym artykule

Streszczenie

Oczyszczanie plazmidowego DNA z E. coli jest podstawową techniką w klonowaniu molekularnym. Oczyszczanie w małej skali (miniprep) z mniej niż 5 ml hodowli bakteryjnej jest szybką metodą weryfikacji klonów lub izolacji DNA, po której następują dalsze reakcje enzymatyczne (reakcja łańcuchowa polimerazy oraz trawienie enzymami restrykcyjnymi). W niniejszym materiale wideo zarejestrowano ogólne procedury miniprepu z wykorzystaniem zestawu QIAprep 8 Miniprep Kit firmy QIAGEN, w celu zaprezentowania tej wysoce wydajnej techniki osobom rozpoczynającym naukę technik biologii molekularnej. Cała procedura opiera się na alkalicznej lizie komórek E. coli, a następnie adsorpcji DNA na krzemionce w obecności wysokiego stężenia soli. Składa się ona z trzech etapów: 1) przygotowanie i klarowanie lizatu bakteryjnego, 2) adsorpcja DNA na membranie QIAprep, 3) przemywanie i elucja plazmidowego DNA. Wszystkie etapy są wykonywane bez użycia fenolu, chloroformu, CsCl i bromku etydyny oraz bez wytrącania alkoholem. Cała procedura zajmuje zazwyczaj mniej niż 2 godziny.

Oświadczenia

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Oczyszczanie plazmidowego DNAminiprep kolonii bakteryjnychmetoda lizy alkalicznejzestaw QIAprep Miniprepadsorpcja DNA na krzemioncewirowaniewytr canie bia ekelucja za pomoc manifoldu pr niowegobufor P1 P2 P3prob wki typu microtube do zbierania DNAmutageneza ukierunkowana

Powiązane artykuły