Mikrosekcja mózgu szczura z podziałem na poszczególne obszary jest niezwykle istotna dla badania różnych chorób neurodegeneracyjnych. Niniejszy film demonstruje mikrosekcję czterech głównych obszarów mózgu, w tym oparyczu węchowego, kory czołowej, prążkowia oraz hipokampa w świeżej tkance mózgowej szczura. Przedstawiono pomocne wskazówki dotyczące szybkiego usuwania poszczególnych regionów, aby zapobiec degradacji RNA i białek w tkance.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Mikrodysekcja mózgu szczura w celu ekstrakcji RNA lub białek ze specyficznego obszaru mózgu
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Mikrosekcja mózgu szczura z podziałem na poszczególne obszary jest niezwykle istotna w badaniach nad różnymi chorobami neurodegeneracyjnymi. Niniejszy film demonstruje mikrosekcję czterech głównych obszarów mózgu, w tym opuszki węchowej, kory czołowej, prążkowia i hipokampa, w świeżej tkance mózgu szczura. Przedstawiono przydatne wskazówki dotyczące szybkiego wyizolowania poszczególnych regionów w celu uniknięcia degradacji RNA i białek w tkance.
Protokół
Krok 1
Uśmierć szczura zgodnie z ustalonymi protokołami. Wyjmij mózg z czaszki i wypłucz go w lodowatej wodzie Milli Q traktowanej DEPC, aby usunąć krew z powierzchni.
Krok 2
Umieść na zimnej płycie metalowej. Przetnij mózg wzdłuż na pół, dzieląc go na prawą i lewą półkulę.
Rysunek 1. Pozycje cięć w widoku przyśrodkowym półkuli mózgu szczura
Krok 3
Pobierz cebulki węchowe bezpośrednio po pierwszym cięciu. Próbkę zamroź błyskawicznie w ciekłym azocie i przechowuj w temperaturze -80°C.
Rycina 2. Disekcja opuszki węchowej
Krok 4
Pobierz korę czołową bezpośrednio po drugim cięciu, używając ostrza i pęsety Dumont nr 5. Zamroź gwałtownie próbkę w ciekłym azocie i przechowuj w temperaturze -80°C.
Rysunek 3. Disekcja kory przedczołowej
Krok 5
Pobierz prążkowie (jądro ogoniaste) bezpośrednio po trzecim cięciu, używając dwóch pęset Dumont No.5. Zamroź gwałtownie próbkę w ciekłym azocie i przechowuj w temperaturze -80°C.
Rysunek 4. Disekcja prążkowia (jądra ogona)
Krok 6
Aby pobrać hipokamp, należy ułożyć mózg stroną brzuszną do góry, a następnie usunąć śródmózgowie, aby odsłonić hipokamp. Wypreparować hipokamp z kory, używając dwóch pęset Dumont No.5. Próbkę zamrozić gwałtownie w ciekłym azocie i przechowywać w temperaturze -80°C.
Rysunek 5. Disekcja hipokampa
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Różne obszary mózgu wiążą się z różnymi chorobami neurodegeneracyjnymi. Na przykład kora przedczołowa i prążkowie są powiązane z chorobą Parkinsona, natomiast hipokamp z chorobą Alzheimera. Precyzyjna mikrodisekcja mózgu pozwala na dokładniejsze wykrywanie zmian w mRNA i białkach w obszarach dotkniętych chorobą.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Zwierzęta były traktowane zgodnie z protokołem wykorzystania zwierząt w badaniach zatwierdzonym przez Komitet ds. Wykorzystania Żywych Zwierząt w Nauczaniu i Badaniach (CULATR) na Uniwersytecie w Hongkongu oraz zgodnie z wytycznymi Narodowych Instytutów Zdrowia (National Institutes of Health) dotyczącymi wykorzystania zwierząt.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Mikroskop | Olympus Corporation | ||
| Narzędzia do sekcji | Płyta metalowa, pęseta, skalpel itp. Indywidualnie zawinięte w folię aluminiową i ogrzewane w 180oC przez osiem godzin w celu usunięcia RNazy. Przed użyciem schłodzone do temperatury lodu. |
Bibliografia
- Palkovits, M. Maps and guide to micro-dissection of the rat brain. , Elsevier. New York. (c.1988).
- Swanson, L. W. Brain maps: structure of the rat brain. 3rd revised edition. , Elsevier Academic Press. (2004).
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
