Artykuł metodologiczny

Mikrodysekcja mózgu szczura w celu ekstrakcji RNA lub białek ze specyficznego obszaru mózgu

DOI:

10.3791/269

⸱

30 sierpnia 2007

 ,  ,  ,  , 
1Laboratory of Neurodegenerative Diseases, Department of Anatomy, LKS Faculty of Medicine, The University of Hong Kong - HKU

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mikrosekcja mózgu szczura z podziałem na poszczególne obszary jest niezwykle istotna dla badania różnych chorób neurodegeneracyjnych. Niniejszy film demonstruje mikrosekcję czterech głównych obszarów mózgu, w tym oparyczu węchowego, kory czołowej, prążkowia oraz hipokampa w świeżej tkance mózgowej szczura. Przedstawiono pomocne wskazówki dotyczące szybkiego usuwania poszczególnych regionów, aby zapobiec degradacji RNA i białek w tkance.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Mikrosekcja mózgu szczura z podziałem na poszczególne obszary jest niezwykle istotna w badaniach nad różnymi chorobami neurodegeneracyjnymi. Niniejszy film demonstruje mikrosekcję czterech głównych obszarów mózgu, w tym opuszki węchowej, kory czołowej, prążkowia i hipokampa, w świeżej tkance mózgu szczura. Przedstawiono przydatne wskazówki dotyczące szybkiego wyizolowania poszczególnych regionów w celu uniknięcia degradacji RNA i białek w tkance.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Krok 1

Uśmierć szczura zgodnie z obowiązującymi protokołami. Wyjmij mózg z czaszki i wypłucz go w lodowatej wodzie Milli Q traktowanej DEPC, aby usunąć krew z powierzchni.

Krok 2

Umieść na zimnej płycie metalowej. Przetnij mózg wzdłuż na pół, dzieląc go na półkulę prawą i lewą.

figure-protocol-1

Rysunek 1.  Pozycje cięć w widoku przyśrodkowym półkuli mózgu szczura
 

Krok 3

Pobierz cebulkę węchową natychmiast po pierwszym cięciu. Próbkę zamroź błyskawicznie w ciekłym azocie i przechowuj w temperaturze -80°C.

figure-protocol-2

Rysunek 2. Disekcja opuszki węchowej

Krok 4

Pobierz korę czołową bezpośrednio po drugim cięciu, używając skalpela i pęsety Dumont nr 5. Próbkę zamroź błyskawicznie w ciekłym azocie i przechowuj w temperaturze -80°C.

figure-protocol-3

Rycina 3. Disekcja kory czołowej

Krok 5

Prążkowiec (jądro ogoniaste) należy pobrać bezpośrednio po trzecim cięciu za pomocą dwóch pęset Dumont No.5. Próbkę należy zamrozić gwałtownie w ciekłym azocie i przechowywać w temperaturze -80°C.

figure-protocol-4

Rysunek 4. Disekcja prążkowia (jądra ogoniastego)

Krok 6

Aby pobrać hipokamp, należy ułożyć mózg stroną brzuszzną do góry, a następnie usunąć śródmózowie, aby odsłonić hipokamp. Wypreparować hipokamp z kory, używając dwóch pęset Dumont No.5. Próbkę zamrozić gwałtownie w ciekłym azocie i przechowywać w temperaturze -80°C.

figure-protocol-5

Rysunek 5. Disekcja hipokampa

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Różne obszary mózgu wiążą się z różnymi chorobami neurodegeneracyjnymi. Na przykład kora przedczołowa i prążkowie są powiązane z chorobą Parkinsona, natomiast hipokamp z chorobą Alzheimera. Precyzyjna mikrodisekcja mózgu pozwala na dokładniejsze wykrywanie zmian w mRNA i białkach w obszarach dotkniętych chorobą.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zwierzęta były traktowane zgodnie z protokołem wykorzystania zwierząt w badaniach zatwierdzonym przez Komitet ds. Wykorzystania Żywych Zwierząt w Nauczaniu i Badaniach (CULATR) na Uniwersytecie w Hongkongu oraz zgodnie z wytycznymi Narodowych Instytutów Zdrowia (National Institutes of Health) dotyczącymi wykorzystania zwierząt.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
MikroskopOlympus Corporation
Narzędzia do sekcjiPłyta metalowa, pęseta, skalpel itp. Indywidualnie zawinięte w folię aluminiową i ogrzewane w 180oC przez osiem godzin w celu usunięcia RNazy. Przed użyciem schłodzone do temperatury lodu.

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Palkovits, M. Maps and guide to micro-dissection of the rat brain. , Elsevier. New York. (c.1988).
  2. Swanson, L. W. Brain maps: structure of the rat brain. 3rd revised edition. , Elsevier Academic Press. (2004).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Ekstrakcja RNAopuszka w chowakora przedczo owapr kowiehipokampciek y azot

Powiązane artykuły