Model intraluminalnego zamknięcia tętnicy środkowej mózgu (MCAO) jest najczęściej stosowanym modelem wśród eksperymentalnych modeli udaru niedokrwiennego. W niniejszym materiale szczegółowo zaprezentujemy cały model z wykorzystaniem laserowej flowmetrii dopplerowskiej oraz przedstawimy reprezentatywne wyniki.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Model wewnątrznaczyniowego zamknięcia tętnicy środkowej mózgu (MCAO) w udarze niedokrwiennym u myszy z prowadzeniem za pomocą laserowej dopplerometrii przepływu
* These authors contributed equally
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Udar mózgu jest trzecią najczęstszą przyczyną zgonów i wiodącą przyczyną niepełnosprawności na świecie, a szacowany koszt jego leczenia w Stanach Zjednoczonych w 2009 roku wyniósł blisko 70 miliardów dolarów1,2. Model intraluminalnego zamknięcia tętnicy środkowej mózgu (MCAO) został opracowany przez Koizumi4 w 1986 roku w celu symulacji tej istotnej patologii ludzkiej u szczura. Modyfikację metody MCAO zaprezentował później Longa3. Obie techniki są powszechnie stosowane do identyfikacji mechanizmów molekularnych uszkodzeń mózgu wynikających z udaru niedokrwiennego oraz potencjalnych metod terapeutycznych5. Ta względnie nieinwazyjna metoda u szczurów została rozszerzona na myszy, aby umożliwić wykorzystanie szczepów transgenicznych i nokautowych6,7. W celu modelowania ogniskowego niedokrwienia mózgu, szew intraluminalny wprowadza się przez tętnicę szyjną wewnętrzną, aby zamknąć podstawę MCA. Usunięcie szwu po określonym czasie symuluje spontaniczną reperfuzję, jednak szew może zostać również pozostawiony na stałe. W niniejszym materiale wideo w sposób krok po kroku zaprezentowane zostaną dwa główne podejścia do przeprowadzania procedury intraluminalnego MCAO u myszy, a także wskazane zostaną potencjalne wady i pułapki. Niedokrwiona tkanka mózgowa zostanie następnie zabarwiona chlorkiem 2,3,5-trifenylotetrazoliu (TTC) w celu oceny zakresu zawału mózgu8.
Protokół
Protokół ten został zatwierdzony przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Wykorzystania Zwierząt (IACUC) na Uniwersytecie Florydy i jest zgodny z „Zasadami Opieki nad Zwierzętami Laboratoryjnymi” (publikacja NIH nr 86-23, wydaniez roku 1985).
1. Materiały
- Zwierzęta: Samce myszy C57BL/6 (Harlan Laboratories, Indianapolis, IN, USA) o masie 20–26 gramów w chwili operacji.
- Znieczulenie:
- Aparat do znieczulenia: system do znieczulenia inhalacyjnego VetEquip (VetEquip Inc., Pleasanton, CA, USA).
- Środek znieczulający do inhalacji: izofluran (Baxter Pharmaceutics, Deerfield, IL).
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Model MCAO jest uznanym modelem odtwarzającym niedokrwienie mózgu u gryzoni. Model ten został po raz pierwszy zastosowany u szczurów, a następnie zaadaptowany dla myszy. Zaletą tej techniki jest brak konieczności wykonywania kraniektomii, co pozwala wyeliminować wpływ manipulacji chirurgicznych na przepuszczalność bariery krew-mózg oraz ciśnienie wewnątrzczaszkowe. Niemniej jednak wiele zmiennych, takich jak różnice między szczepami10, rozmiar końcówki szwy11, czas trwania okluzji6, tempe.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy oświadczają, że nie występuje konflikt interesów.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze | |
|---|---|---|---|---|
| Samce myszy C57BL/6 | Zwierzę | Harlan Laboratories | 20-26 g | |
| Mikroskop stereoskopowy | Mikroskop | Leica Microsystems | zoom 6.3:1 | |
| Światłowodowy iluminator | Iluminator | TechniQuip Corp., Livermore, CA, USA | FO1–-150 | |
| Izofluran | Znieczulenie | Baxter Internationl Inc. | 1001936060 | |
| Nożyczki tęczówkowe SuperCut, proste | Narzędzie chirurgiczne | World Precision Instruments, Inc. | 14218 | |
| Mikronożyczki Vannasa, proste | Narzędzie chirurgiczne | World Precision Instruments, Inc. | 14003 | |
| Pinceta Dumonta z cienką końcówką | Narzędzie chirurgiczne | World Precision Instruments, Inc. | 503290 | |
| Klip naczyniowy | Narzędzie chirurgiczne | World Precision Instruments, Inc. | 14120 | |
| Wysokoczęstotliwościowy osuszacz 900 | Narzędzie chirurgiczne | World Precision Instruments, Inc. | 500397 | |
| Szycie chirurgiczne mononylonowe 7-0 | Szycie | Ethicon Inc. | 1647G | Szycie do okluzji |
| Szycie chirurgiczne jedwabne 7-0 | Szycie | Ethicon Inc. | 7733G | Szycie do ligacji |
| Klej silikonowy RTV | Guma silikonowa | World Precision Instruments, Inc. | 1571 | |
| Vetbond | Klej tkankowy | 3M | 70200746587 | |
| Maść do oczu Puralube Vet | Maść do oczu | Pharmaderm Animal Health | ||
| Wodorochlorek buprenorfiny | Leki przeciwbólowe | Hospira Inc. | NDC 0409-2012-32 | |
| Urządzenie do kauteryzacji termicznej | World Precision Instruments, Inc. | 501292 | ||
| System PeriFlux 5000 | Flowmetria TCD | Perimed | ||
| BAT-12 | Termometr rektalny | World Precision Instruments, Inc. | BAT-12R | |
| T/PUMP, TP600 | Koc grzewczy | Gaymar Industries | ||
| chlorek 2,3,5-trifenylotetrazoliowy | Odczynnik | Sigma-Aldrich | T8877 | |
| Szatkownica do macierzy mózgu myszy | Szatkownica do mózgu | Zivic Instruments | BSMAS001-1 |
Bibliografia
- Recommendations on stroke prevention, diagnosis, and therapy. Report of the WHO Task Force on Stroke and other Cerebrovascular Disorders. Stroke; a journal of cerebral circulation. 20, 1407-1431 (1989).
- Lloyd-Jones, D.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
Przeglądaj więcej artykułów
