Deparafinizacja i ponowne uwodnienie skrawków tkanek: dwuetapowa procedura usuwania wosku parafinowego z preparatów tkankowych FFPE, a następnie ponowne uwodnienie tkanek

Streszczenie

Źródło: Sugimoto, K. et al. Analiza całego genomu metylacji DNA w raku przewodu pokarmowego. J. Vis. Exp. (2020)

W tym filmie pokazujemy przetwarzanie FFPE lub utrwalonych formaliną skrawków zatopionych w parafinie, uzyskanych z tkanki nowotworowej przewodu pokarmowego. Etapy deparafinowania i ponownego uwodnienia umożliwiają przetworzenie próbki tkanki do kolejnych zastosowań analitycznych.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem ludzi zostały przeprowadzone zgodnie z instytucjonalnymi, krajowymi i międzynarodowymi wytycznymi dotyczącymi dobrobytu ludzi i zostały sprawdzone przez lokalną komisję rewizyjną instytucji.

1. Mycie szkiełek

1. Przygotować 10 μm niebarwionych skrawków zatopionych w parafinie (FFPE) utrwalonych w formalinie.
2. Umieść szkiełka w szklanym uchwycie na szkiełka: użyj około 3-5 największych szkiełek o przekroju poprzecznym, chyba że tkanka jest minimalna i potrzeba więcej szkiełek.
3. Napełnij uchwyt szkiełka ksylenem i upewnij się, że cała tkanka na szkiełku jest zanurzona. Odstawić na 15 minut.
4. Po 15 minutach wylej ksylen ze szkiełkami przytrzymywanymi końcówką pipety, aby szkiełka nie wypadły.
5. Wlej więcej ksylenu do tego samego poziomu co poprzednio. Odstawić na kolejne 15 minut.
6. Po 15 minutach ponownie wylej ksylen.
7. Napełnij uchwyt szkiełka 100% etanolem (EtOH) i upewnij się, że cała tkanka na szkiełku jest całkowicie zanurzona. Odstawić na 3 minuty.
8. Wylej EtOH, ostrożnie trzymając szkiełka. Uzupełnij do tego samego poziomu większą ilością EtOH. Odstawić na 2 minuty.
9. Ponownie odlej EtOH i wyjmij szkiełko. Ostrożnie połóż je ekranem do góry na czystym ręczniku papierowym do wyschnięcia. Odstawić na 10 minut.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
ksylen	Sigma-Aldrich	214736
100% etanol	Sigma-Aldrich	Numer katalogowy: 24194