Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Pionowa rękawowa resekcja żołądka i zabiegi pozorowane
- W dniu operacji zważ myszy, aby uzyskać wyjściowy pomiar masy.
- Wyposaż salę operacyjną w system znieczulający, podgrzewaną łaźnię wodną i poduszkę grzewczą. Ustawić łaźnię wodną na 37 °C i użyć jej do ogrzania 0,9% roztworu soli do nawadniania. Oczyść pole operacyjne 70% etanolem i użyj sterylnej techniki, aby otworzyć autoklawowany pakiet chirurgiczny i narzędzia.
nuta: Poduszka grzewcza służy do utrzymywania zwierzęcia w cieple podczas operacji i rekonwalescencji po znieczuleniu.
- Za pomocą komory indukcyjnej znieczulij mysz 5% izofluranem i natężeniem przepływuO2 1 l/min. Upewnij się, że mysz znajduje się w odpowiedniej płaszczyźnie znieczulenia, wykonując szczypanie palca u nogi. Utrzymuj mysz z 1-3% izofluranem i natężeniem przepływuO2 0,6 l/min po osiągnięciu stałej płaszczyzny znieczulenia.
- Po znieczuleniu myszy nałóż maść na oczy (patrz Tabela materiałów), aby utrzymać je wilgotne podczas operacji. W tym czasie należy również podać lek przeciwbólowy, taki jak meloksykam (2 mg/kg podskórnie). Przypnij włosy od pępka do pachy, delikatnie przytrzymując skórę, aby zapewnić napięcie.
- Ponieważ skóra myszy jest cienka i delikatna, należy uważać, aby nie powodować zmian skórnych podczas przycinania włosów. Oczyść skórę jodonem i alkoholem.
- Załóż sterylne rękawiczki i przygotuj sterylne pole operacyjne i narzędzia. Resztę zabiegu wykonaj techniką sterylną. Przygotuj sterylne pole operacyjne, umieszczając sterylne obłożenia chirurgiczne po obu stronach myszy. Użyj autoklawowanej folii aluminiowej, aby stworzyć serwetkę chirurgiczną dla myszy.
- Wytnij mały otwór w folii aluminiowej, aby umożliwić dostęp do brzucha myszy.
- Wykonaj nacięcie skóry od połowy brzucha (pępka) do poziomu chrząstki mieczykowatej za pomocą nożyczek do tęczówki. Zidentyfikuj linea alba i użyj nożyczek do tęczówki, aby przeciąć ścianę ciała wzdłuż linea alba. Użyj CTA, aby delikatnie podnieść żołądek z brzucha, a następnie tępo wypreparuj większą sieć z większej krzywizny żołądka.
- Podwiązać krótką tętnicę żołądkową, która biegnie między dnem żołądka a śledzioną, umieszczając dwie ligatury za pomocą wchłanialnego szwu monofilamentowego 7-0. Użyj nożyczek sprężynowych, aby przeciąć między dwoma ligaturami. Po przecięciu tętnicy całkowicie wyjdź z żołądka z jamy brzusznej. Umieść gazę pod brzuchem i zwilż solą fizjologiczną, aby tkanka była wilgotna.
- W przypadku zabiegu VSG podwiązaj wydatne gałęzie tętnicy i żyły żołądkowej za pomocą nici wchłanialnej monofilamentowej 7-0 z igłą stożkową, używając 3 rzutów na każdy węzeł. Umieść ligatury tuż poniżej (tj. w kierunku mniejszej krzywizny żołądka) zamierzonej linii przecięcia.
nuta: Zamierzona linia przecięcia zaczyna się na ~2 mm powyżej (czyli w kierunku większej krzywizny żołądka) wcięcia sercowego żołądka i co najmniej 2 mm poniżej margo pilcatus i rozciąga się do bliższego końca prawego płata trzustki. Zazwyczaj na ścianę żołądka przypadają 4 naczynia, które należy podwiązać; Może się to jednak różnić w zależności od myszy.
- Aby zapobiec rozlaniu się treści żołądkowej podczas resekcji żołądka, umieść prostą ciągłą linię szwu przechodzącą przez obie ściany żołądka tuż poniżej zamierzonej linii przecięcia, używając wchłanialnego szwu monofilamentowego 6-0 ze stożkową igłą. Rozpocznij linię szwu po prawej stronie przełyku i poniżej margo pilcatus i zakończ tuż nad trzustką.
- Umieść hemostatyki z cienką końcówką powyżej linii szwów i użyj nożyczek sprężynowych, aby przeciąć między linią szwów a hemostatami. Usunąć przeciętą tkankę żołądkową ze sterylnego pola operacyjnego. Użyj CTA, aby oczyścić żołądek z krwi i trawienia.
- Wzmocnić przyleganie ścian żołądka za pomocą nici wchłanialnej z żyłki 6-0 z igłą stożkową za pomocą prostego wzoru nieciągłego.
nuta: Zalecany jest prosty wzór szwów nieciągłych, ponieważ zapewnia to bezpieczniejsze zamknięcie niż prosty wzór szwów ciągłych.
- Resztki żołądka należy przepłukiwać solą fizjologiczną przez cały czas trwania zabiegu, aby tkanka była wilgotna i czysta. Użyj igły do zgłębnika 20G dołączonej do strzykawki o pojemności 20 ml, aby wykonać płukanie żołądka solą fizjologiczną. Użyj tego rozmiaru, aby zapewnić odpowiednie ciśnienie bez ryzyka uszkodzenia tkanki żołądka z powodu nadmiernego ciśnienia lub przypadkowego uszkodzenia tkanki żołądka w wyniku użycia zwykłej spiczastej igły.
- Użyj co najmniej 20 węzłów, aby bezpiecznie zamknąć żołądek; zwróć uwagę na zamknięcie wzdłuż strony przełyku, ponieważ ta strona jest trudniej dostępna i dlatego często jest miejscem rozejścia się.
- Upewnij się, że nie ma wycieków, delikatnie naciskając na żołądek za pomocą CTA. Jeśli zostaną zidentyfikowane nieszczelności, umieść dodatkowe proste, nieciągłe węzły w obszarach wycieku, a następnie ponownie przeprowadź test szczelności. Test szczelności, dopóki nie zostanie wykryty wyciek.
- Wykonaj ostatnie dokładne płukanie żołądka przy użyciu co najmniej 60 ml soli fizjologicznej, aby upewnić się, że nie pozostały żadne zakaźne cząstki stałe.
- Umieść żołądek z powrotem w jamie brzusznej pod wątrobą za pomocą CTA. Umieść CTA wzdłuż grzbietowej części jamy brzusznej, aby wchłonąć cały nadmiar płynu. Za pomocą igły 18G wstrzyknąć roztwór Ringera (LRS) z antybiotykami lub bez antybiotyków (0,5 ml LRS +/- 20 mg/kg enrofloksacyny) bezpośrednio do jamy brzusznej, tuż przed zamknięciem.
nuta: Zastępuje to utratę płynów występującą podczas operacji i zapewnia metodę bezpośredniego stosowania antybiotyków w miejscu operacyjnym, aby pomóc w powrocie do zdrowia.
- Zamknij warstwę mięśni brzucha za pomocą wchłanialnego szwu monofilamentowego 6-0 ze stożkową igłą w prostym, nieciągłym wzorze. Następnie zamknij warstwę skóry za pomocą wchłanialnego szwu monofilamentowego 6-0 w prostym, ciągłym wzorze.
- Umieść klej tkankowy na skórze i zawiń skórę nad linią szwów, aby zakopać szew, aby mysz nie mogła zakłócić zamykania rany po operacji.
- Wyłącz izofluran i pozwól myszy zregenerować się na poduszce grzewczej przez 10-15 minut przed powrotem do klatki domowej. Nie pozostawiaj zwierzęcia bez opieki, dopóki nie odzyska przytomności i nie będzie w stanie się poruszać.
- Trzymaj zwierzęta w pomieszczeniach pojedynczo do czasu całkowitego wyzdrowienia po operacji.
nuta: Jeśli przez cały czas trwania badania mają być uzyskane dokładne pomiary spożycia pokarmu, myszy powinny być trzymane pojedynczo przez cały czas trwania badania. Istnieje ryzyko zablokowania ciała obcego przez jedzenie ściółki z domowej klatki. Zwierzęta powinny być trzymane w klatkach wolnych od ściółki, z wyjątkiem materiału do budowy gniazda w celu wzbogacenia (patrz tabela materiałów).
