$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Zwierzę znieczulające
- Użyj stołowego systemu znieczulającego, aby znieczulić zwierzę izofluranem. Włącz zbiornikO2 i ustaw przepływomierz tlenu na 1 l/min.
- Umieść dorosłą samicę myszy C57BL/6J w komorze indukcyjnej. Włącz i ustaw waporyzator izofluranu na 3% w celu indukcji. Mysz powinna być w znieczuleniu w ciągu 2 minut. Podać podskórnie buprenorfinę przeciwbólową (0,1 mg/kg) po wyjęciu myszy z komory indukcyjnej w celu prewencyjnego znieczulenia.
nuta: W tym protokole wykorzystuje się samice myszy, ponieważ są one łatwiejsze w pracy podczas cewnikowania cewki moczowej. Protokół działa również w przypadku samców myszy, ale konieczna jest dodatkowa ostrożność.
- Nałóż maść okulistyczną na oczy zwierzęcia, aby zapobiec wysuszeniu. Połóż znieczuloną mysz przodem do góry na poduszce grzewczej, tak aby jej nos znajdował się w stożku nosowym. Przekręć przełącznik obwodu powietrza, aby izofluran mógł przejść przez stożek nosowy.
- Umocuj głowę i stożek nosowy taśmą klejącą. Dostosuj parownik izofluranu do 2% w celu konserwacji.
- Unieruchomić kończyny taśmą klejącą. Wykonaj testy szczypania palców u stóp, aby upewnić się, że zwierzę jest w głębokim znieczuleniu, a następnie ogol okolice brzucha.
2. Wyczerpanie moczu i płukanie pęcherza
- Nałóż lubrykant na cewnik (24G, długość 2,11 cm, średnica zewnętrzna 0,045 cm) i upewnij się, że jego zewnętrzna powierzchnia jest całkowicie pokryta.
- Włóż cewnik do otworu cewki moczowej i powoli dociśnij go, aż dotrze do pęcherza, po czym mocz powinien wypłynąć przez cewnik. Delikatnie uciskaj brzuch, aby pomóc w odprowadzaniu moczu.
- Sprawdź, czy cewnik jest prawidłowo wprowadzony do pęcherza, obserwując automatyczny odpływ moczu. Unikaj przekłuwania cewki moczowej i ściany pęcherza moczowego i w razie potrzeby kilkakrotnie nałóż lubrykant.
- Wylać mocz za pomocą pipety do zlewki na odpady.
- Odpipetować 80 μl soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS) do zewnętrznego końca cewnika, tak aby drugi koniec nadal znajdował się w pęcherzu moczowym. Ostrożnie przymocować strzykawkę o pojemności 1 ml do cewnika. Delikatnie wepchnąć strzykawkę, aby wstrzyknąć PBS do pęcherza moczowego. Pozostaw trochę PBS w cewniku, aby uniknąć tworzenia się pęcherzyków powietrza w pęcherzu.
- Wyjąć strzykawkę. Poczekaj, aż PBS spłynie z pęcherza. Delikatnie naciśnij brzuch, aby ewakuować PBS.
- Wyrzucić PBS z cewnika za pomocą pipety do zlewki na odpady.
- Powtórz pranie PBS (kroki od 2.4 do 2.6) jeszcze dwa razy.
nuta: Na tych etapach prania należy pracować delikatnie. Krew w cewniku lub niewydolność automatycznego odpływu płynu zwykle wskazuje na przekłucie cewki moczowej