Artykuł metodologiczny

Dostarczanie plazmidów DNA do nabłonka dróg moczowych pęcherza myszy: procedura oparta na elektroporacji mająca na celu skuteczne dostarczanie plazmidów DNA do komórek urotelialnych pęcherza myszy w celu wygenerowania modeli modyfikowanych genetycznie

30 kwietnia 2023

W tym artykule

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Chuan, Y. et al. Nowatorska metoda dostarczania plazmidowego DNA do nabłonka moczowego myszy metodą elektroporacji. J. Vis. Exp.(2018)

Ten film demonstruje dostarczanie plazmidu DNA do nabłonka dróg moczowych pęcherza myszy za pomocą kombinacji cewnikowania cewki moczowej i technik elektroporacji. Opisana procedura pozwala na wygenerowanie modeli raka pęcherza moczowego u myszy.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Przygotowanie plazmidu i narzędzi

  1. Dla każdego pęcherza moczowego do transfekcji przygotuj co najmniej 20 μl plazmidu DNA (1 μg/μl).
  2. Dodać 1 μl błękitu trypanowego do 20 μl roztworu plazmidu w probówce mikrowirówkowej o pojemności 1,5 ml. Odpipetować do dobrego wymieszania.
  3. Autoklaw wszystkie narzędzia chirurgiczne i wysterylizuj miejsce pracy 70% etanolem. Często spryskuj narzędzia chirurgiczne i rękawice 70% etanolem lu....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Strzykawka BD 1 ml TBrybakNumer katalogowy: 148232E
BuprenorfinaSigmaB9275-50MG
Pęseta DumontRoboz Chirurgiczny InstrZłącze RS-5005Leczyć 70% etanolem przed użyciem chirurgicznym
Elektroporator falowy ECM830 SQAparatura Harvarda450052
Exel International Jednorazowe cewniki dożylne SafeletFisher NaukowyNumer katalogowy 14-841-2124G, długość 2,11 cm, średnica zewnętrzna 0,045 cm
Bardzo cienkie mikro nożyczki preparacyjneRoboz Chirurgiczny InstrZłącze RS-5135Leczyć 70% etanolem przed użyciem chirurgicznym
IzofluranWeterynarz jeden501017
K&H Podgrzewana mata spoczynkowa dla małych zwierząt, 9 na 12 caliAmazonkaPrzykryj matę grzewczą ręcznikami papierowymi
Maść okulistycznarybakNC0849514
PBS, pH 7,4Technologie życiowe10010049
Końcówki do pipet 200 μLUSA NaukoweNumer katalogowy: 1111-0206
Końcówki do pipet, uniwersalne dopasowanie; 0,1 do 10 μlrybak02707438(CS)
PIPETMAN NEO P2GilsonF144561
PIPETMAN NEO P200NGilsonF144565
plazmid CAG-GFPAddgene powiedział:Numer katalogowy: 16664
Pęseta platynowa 5 mmAparatura Harvarda450489Średnica 5 mm
nożyczkiRoboz Chirurgiczny InstrZłącze RS-5880Leczyć 70% etanolem przed użyciem chirurgicznym
SznurekAmazonkaMandala Crafts 150D 210D 0,8mm 1mm skórzane szwy do szycia płaska woskowana nić sznurek
Taśma klejącarybak19047257
Therio-gel Smar weterynaryjnyPBS Zdrowie zwierząt353-736
Niebieska plama trypanaTechnologie życiowe15250061
V-1 Znieczulenie systemowe stołoweWyposażenie weterynaryjne901806
Vicryl szew fioletowy 18" FS-2 cięcie 5-0rybakNC0578475
Walgreens Powidon Jod 10%Walgreens powiedział:953982
Klips do ranrybakNumer katalogowy: 18045
Aplikator do spinania ranrybakRok 1804
sznurek

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Dostarczanie plazmidowego DNAprocedura elektroporacjicewnikowanie cewki moczowejfluorescencyjny gen reporterowymodele raka p cherza moczowegowstrzykiwanie roztworu plazmidowegogenerator do elektroporacjiszycie naci cia chirurgicznego

Powiązane artykuły