Test przepuszczalności naśladującej barierę krew-mózg: Test in vitro do oceny przepuszczalności naśladownictwa BBB dla cząsteczek znacznikowych

Streszczenie

Źródło: Le Joncour, V. et al. Przewidywanie dostarczania ładunków in vivo przy użyciu bariery nowotworowej krew-mózg w naczyniu. J. Vis. Exp. (2019)

Ten film opisuje test przepuszczalności do oceny przepuszczalności bariery krew-mózg in vitro przy użyciu cząsteczek fluoresceiny sodu.

Protokół

1. Pomiar przepuszczalności BBTB Mimic
   

   1. Bierna dyfuzja drobnocząsteczkowego barwnika fluorescencyjnego fluoresceiny sodowej (Na-Fl) w czasie od strony krwi do strony mózgu wkładek pozwala na obliczenie wartości przepuszczalności według następującego wzoru:
      Tutaj dFwell to wartość fluorescencji zmierzona w studzience w określonym punkcie czasowym pomniejszona o wartość autofluorescencji pożywki do hodowli komórkowej, dT to czas w sekundach, A to powierzchnia bariery w centymetrach kwadratowych, ....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Materiał i odczynnik
10 ml pipety serologicznej	ThermoFisher Naukowy	170361
ABM Pożywka podstawowa, 500 ml	Lonza	Zobacz materiał CC-3187	Dla pierwotnych astrocytów ludzkich. ABM+: zawiera wszystkie dodatki z mieszanki suplementów. ABM -: wszystkie dodatki z wyjątkiem rhEGF i FBS
Podstawowy średni orzeł	ThermoFisher Naukowy	21010046	Zobacz materiał BME-1
Zmodyfikowana szynka Eagle's Medium/Nutrient F-12 firmy Dulbecco	Gibco (firma Gibco)	21331-020	Specyficzne dla hodowli sferek pochodzących od pacjenta wyizolowanych w naszym laboratorium, mogą się różnić dla innych linii komórkowych glejaka
Greiner CELLSTAR 96-dołkowe płytki S	Sigma-Aldrich	Greiner 655090	Czarne studzienki styropianowe z płaskim dnem (z dnem mikroprzezroczystym)
Sól sodowa fluoresceiny	Sigma-Aldrich	Zobacz materiał F6377
Czytnik mikropłytek FLUOstar Omega	BMG Labtech
Komórek
bEND3	Kontroler ATCC (Kontroler T	CRL-2299	Hodowane w: DMEM (1g/L glukozy) uzupełnionym 10% FBS, 5 ml L-glutaminy i 5 ml penicyliny/streptomycyny
HIFko unieśmiertelnione astrocyty myszy	Izolowany w laboratorium dr Gabriele Bergers	https://doi.org/10.1016/ S1535-6108(03)00194-6	Hodowane w: BME-1 uzupełnione 5% FBS, 5 ml 1 M HEPES, 5 ml 100 mM pirogronianu sodu, 3 g D-glukozy i 5 ml penicyliny/streptomycyny
HuAR2T	Odizolowany w laboratorium dr Dagmar Wirth	https://doi.org/10.1089/ dziesięć.herbata.2009.0184	Hodowane w: EBM-2 z SupplementMix
Normalne ludzkie astrocyty pierwotne	Lonza	CC-2565	Hodowane w: ABM z SingleQuots

powiedział: powiedział: powiedział: powiedział: