Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Ogólne przygotowanie przedoperacyjne
- Pościć myszy przez 6 godzin przed zabiegiem. Pokarm w diecie żelowej podawano 3 dni przed zabiegiem i wyłącznie jeden dzień przed zabiegiem. Wywołać znieczulenie w komorze z 5% izofluranem (0,4 l/min) iO2 (ditlenem; 0,4 l/min). Wykonaj test szczypania palców u stóp, aby potwierdzić, że znieczulenie jest skuteczne. Podawać leki przeciwbólowe (0,1 mg/kg buprenorfiny), antybiotyki (10 mg/kg marbofloksacynę) i prokinetykę (1 mg/kg metoklopramidu) we wstrzyknięciach podskórnych.
- Przydziel określony obszar roboczy do zabiegów chirurgicznych (z dala od ruchu laboratoryjnego i wentylatorów). Oczyść obszar operacyjny dedykowanymi środkami do dezynfekcji twardych powierzchni. Umieść poduszkę grzewczą w obszarze przestrzeni roboczej, aby utrzymać homeotermię myszy podczas operacji. Nałóż czystą, chłonną podkładkę pod poduszkę na poduszkę grzewczą.
- Ogol brzuch od mostka do miednicy za pomocą elektrycznej maszynki do golenia. Owiń brzuch myszy w wysterylizowaną folię plastikową (Rysunek 1A) i umieść mysz w pozycji leżącej na poduszce grzewczej.
- Nałóż maść weterynaryjną na oczy, aby zapobiec wysuszeniu w znieczuleniu. Umieść mysz w stożku nosowym i utrzymuj znieczulenie 2% izofluranem (0,4 l/min) iO2 (0,4 l/min).
- Przed rozpoczęciem operacji załóż sterylny fartuch do badania, jednorazowy czepek do szorowania, maskę na twarz i sterylne rękawiczki. Otwórz autoklawowane opakowanie zawierające wysterylizowany zestaw narzędzi chirurgicznych, który jest wymagany na wszystkich etapach operacji. Wytnij okienko w wysterylizowanej folii i zdezynfekuj skórę 2 kolejnymi roztworami jodu powidonu.
2. Ominięcie żołądka Roux-en-Y: zabieg chirurgiczny
- Laparotomia medianowa
- Pod mikroskopem dwuokularowym i skalpelem wykonaj nacięcie w linii środkowej od mostka do środka brzucha, aby otworzyć jamę brzuszną (nie uszkodzić mięśni brzucha). Chronić skórę sterylnym kompresem nasączonym roztworem soli fizjologicznej o temperaturze 37 °C (ryc. 1B).
- Kończyna żółciowo-trzustkowa i kończyna pokarmowa
- Eksternalizuj jelito (ryc. 1C). Odmierz 8 cm od odźwiernika i wykonaj dwie ligatury jelita z 5,0 szwami niewchłanialnymi (ryc. 1D).
- Przeciąć jelito między dwiema ligaturami (ryc. 1E). Umieść bliższą kończynę dwóch końców w lewym górnym kwadrancie brzucha. Uwaga: Będzie on używany jako kończyna pokarmowa (ryc. 1F).
- Umieść dystalną kończynę dwóch końców skierowaną w stronę kończyny przewodu pokarmowego 6 cm poniżej kończyny bliższej (ryc. 1F).
nuta: Będzie to używane jako kończyna żółciowa.
- Jejuno-jejunostomia
- Przeciąć zarówno kończynę proksymalną, jak i pętlę jelitową za pomocą mikronożyczek i wykonać dwa nacięcia antymetryzkowe o tej samej długości (ryc. 1G i 1H).
- Wykonaj zespolenie boki-bok za pomocą dwóch niewchłanialnych szwów 8.0. Najpierw wykonaj zespolenie po stronie grzbietowej (ryc. 1I), a następnie zespolenie po stronie brzusznej (ryc. 1J).
- Delikatnie zwiń 2 zwilżone waciki w kierunku każdej strony zespolenia, aby upewnić się, że szew jest szczelny. W komplecie z niewchłanialnymi szwami 8.0 w przypadku przeciekania.
- Gastro-jejunostomia
- Delikatnie zmobilizuj żołądek za pomocą zwilżonych wacików. Uwolnij żołądek z bocznych ścisłych przyczepów tkanki łącznej za pomocą zwilżonych wacików lub mikronożyczek.
- Delikatnie całkowicie uzewnętrznij żołądek, umieszczając za żołądkiem ponownie wchłanialny hemostatyczny kompres kolagenowy. Wykonaj podwiązanie odźwiernika za pomocą niewchłanialnego szwu 5.0 przeprowadzonego przez sieć za pomocą zakrzywionych mikrokleszczyków (ryc. 1K i 1L).
- Przetnij zarówno brzuszną stronę brzucha, 1,5 cm od odźwiernika, jak i dystalną kończynę za pomocą mikronożyczek, tworząc dwa nacięcia o tej samej długości (ryc. 1M).
- Wykonaj zespolenie boki-bok za pomocą dwóch niewchłanialnych szwów 8.0. Zacznij od zespolenia po stronie grzbietowej (ryc. 1N), a następnie wykonaj zespolenie po stronie brzusznej (ryc. 1O). Delikatnie zwiń 2 zwilżone waciki bawełniane w kierunku każdej strony zespolenia, aby upewnić się, że szew jest szczelny. W komplecie z niewchłanialnymi szwami 8.0 w przypadku przeciekania.
- Zamknięcie brzucha
- Zamknij warstwę mięśniową ściany brzucha za pomocą niewchłanialnych szwów 5,0 (ryc. 1P). Zmniejszyć znieczulenie, zmniejszając stężenie izofluranu do 1%. Zamknij skórę za pomocą niewchłanialnych szwów 5.0 (Rysunek 1Q). Podawać 25 ml/kg ciepłego roztworu soli fizjologicznej we wstrzyknięciu podskórnym.
3. Ogólna opieka pooperacyjna
- Odstaw izofluran i kontynuuj przepływO2 0,8 l/min, aż mysz całkowicie się obudzi. Nie pozostawiaj myszy bez opieki, dopóki nie odzyska kontroli motorycznej, co jest sygnalizowane tym, że zwierzę zaczyna poruszać się po klatce i jest w stanie stać i chodzić bez upadku.
- Umieść mysz (tylko jedną mysz na klatkę) w inkubatorze w temperaturze 30 °C na 5 dni.
- Utrzymuj suplementację żelaza (0,5 mg/kg/dzień; wstrzyknięcie podskórne) i witamin (800 mg/180 ml w wodzie) u myszy RYGB do końca protokołu.
- Bezpłatny dostęp do diety żelowej (dieta żelowa o wysokiej zawartości tłuszczu: 10% smalcu, 10% cukru płynnego, 57% wody) przez 5 dni po zabiegu. Ponownie wprowadź stałą dietę 3 dni po zabiegu.
- Podskórnie wstrzykuje się buprenorfinę (0,1 mg/kg mc., dwa razy na dobę, od dnia 0 do dnia 3 po operacji), meloksykam (1 mg/kg mc., od dnia 0 do dnia 3 po operacji), metoklopramid (1 mg/kg mc., od dnia 0 do dnia 5 po operacji) i marbofloksacynę (10 mg/kg, od dnia 0 do dnia 3 po operacji)
