Dostarczanie cząsteczek znacznikowych w Cisterna Magna: metoda dostarczania fluorescencyjnych cząsteczek znacznikowych poprzez bezpośrednią kaniulację Cisterna Magna u świni

Streszczenie

Źródło: Bèchet, N. B., et al. Bezpośrednia implantacja kaniuli w Cisterna Magna u świń. J. Vis. Exp. (2021).

Ten film opisuje protokół dostarczania cząsteczki znacznikowej poprzez bezpośrednią kaniulację cisterna magna w mózgu świni. Ta metoda pomaga uwidocznić rozkład płynu mózgowo-rdzeniowego w układzie limfatycznym.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Kaniulacja i iniekcja

UWAGA: Ten krok wymaga co najmniej dwóch osób i jest wykonywany z podniesioną głową zwierzęcia i zgiętą szyją.

1. Zacznij od znieczulonej świni, wstępnie zoperowanej chirurgicznie dostępną cisterna magna.
2. Upewnij się, że jedna osoba podnosi i zgina głowę i szyję zwierzęcia, podczas gdy druga dotyka palpacyjnie cisterna magna, odnotowując jego anatomiczne położenie.
3. Powoli i ostrożnie wprowadzić kaniulę 22 G przez oponę twardą do cisterna magna pod kątem do osi podłużnej.
   nuta: Nie wkładaj kaniuli zbyt głęboko, ponieważ może to spowodować uszkodzenie mózgu. Wiedza o tym, jak daleko włożyć kaniulę, wiąże się z doświadczeniem w zrozumieniu, jak to jest, gdy kaniula przebija oponę twardą. Zasadniczo, tak jak opona twarda została przebita, kaniula jest wystarczająco głęboka, aby można było skutecznie wstrzyknąć znacznik. Głębokość ta wynosi około 3-5 mm, ale będzie się różnić w zależności od wielkości lub wieku zwierzęcia. Udana kaniulacja powinna być natychmiast widoczna poprzez wizualizację wyraźnego, pulsacyjnego płynu mózgowo-rdzeniowego wznoszącego się do kaniuli. Aby uzyskać najlepszy wynik, zaleca się wcześniejsze przećwiczenie kilku kaniulacji u zwierząt poddanych eutanazji, aby zrozumieć zasady przekłuwania opony twardej.
4. Wyjmij igłę z kaniuli i załóż nasadkę na zamek.
5. Najpierw nałóż superglue i akcelerator w miejscu, w którym kaniula wchodzi do tkanki, a następnie nałóż cement dentystyczny. Odczekaj 5 minut, aż cement stwardnieje.
6. Ostrożnie zdejmij nasadkę z kaniuli i przymocuj męski koniec kranu dożylnego z przedłużeniem 10 cm ze znacznikiem do kaniuli.
7. Powoli wstrzykiwać znacznik ręcznie lub za pomocą mikropompy infuzyjnej z szybkością 100 μl/min. Wyjmij 3-drożny kran dożylny z przedłużeniem 10 cm i zastąp go nasadką. Znacznik powinien być teraz widoczny pulsująco u podstawy kaniuli.
   nuta: W przypadku wstrzykiwania ręcznego należy to robić, aż znacznik będzie nadal widoczny w trzonie kaniuli, około 1-2 mm powyżej miejsca, w którym cement dentystyczny pokrywa trzon.
8. Po wstrzyknięciu należy umieścić worki z piaskiem pod szyją, aby utrzymać pewne zgięcie. Głowę można następnie uwolnić, a zwierzę pozostawia się w pozycji spoczynkowej na brzuchu.
9. Zwolnij samozabezpieczające się zwijacze i ułóż mięśnie tak, jak leżały wcześniej. Zbliż skórę do siebie nad mięśniami za pomocą chirurgicznych zacisków na ręczniki.
10. Przykryj zaciski ręcznika i nacięcie gazą, a następnie kocem, aby ograniczyć utratę ciepła.
11. Pozostawić znacznik do krążenia przez pożądany czas przed eutanazją zwierzęcia przez dożylne wstrzyknięcie pentobarbitalu (140 mg/kg). Potwierdź eutanazję przez brak szmerów serca po osłuchiwaniu stetoskopem.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Igła 18G	Mediq (Mediq)
Strzykawka 1ml	FischerSci	15849152
Kaniula 20G	Mediq (Mediq)	nie
Kaniula 22G	Mediq (Mediq)	nie
Albumina surowicy bydlęcej Alexa-Fluor 647 Koniugat	Drukarka ThermoFischer	A34785	2 fiolki (10 mg)
CaCl2	Sigmaaldrich	Zobacz materiał C1016
Cement dentystyczny	Agnthos powiedział:	Zobacz materiał 7508
glukoza	Sigmaaldrich	Kontroler G8270
Akcelerator CA Insta-Set	BSI-Inc	Zobacz materiał BSI-151
Bateria dożylna 3-drożna z przedłużeniem 10cm	Bbraun	nie
Kcl	Sigmaaldrich	Zobacz materiał P9333
Marker	nie	nie
MgCl2	Sigmaaldrich	Zobacz materiał M8266
Woda MilliQ	nie	nie
NaCL	Sigmaaldrich	Zobacz materiał S7653
NaH2PO4	Sigmaaldrich	Zobacz materiał S8282
NaHCO3	Sigmaaldrich	Zobacz materiał S5761
słony	Mediq (Mediq)	nie
Zwijacze samozabezpieczające	nie	nie
Klej Superglue	nie	nie
Zakrzywione nożyczki chirurgiczne	nie	nie
Zaciski do ręczników chirurgicznych	nie	nie

powiedział: TGL powiedział: powiedział: powiedział: