Wykonywanie iniekcji do płata oczodołu górnego gruczołu łzowego: technika wywoływania zespołu suchego oka w modelu królika

Streszczenie

Źródło: Honkanen, R. A. et al, Króliczy model choroby suchego oka z niedoborem wody wodnistej wywołanej wstrzyknięciem konkanawaliny A do gruczołów łzowych: zastosowanie w badaniach skuteczności leków. J. Vis. Exp. (2020).

Ten film opisuje procedurę wywoływania zespołu suchego oka u modelu królika poprzez wstrzyknięcie konkanawaliny A do płata oczodołowego gruczołu łzowego górnego. Opracowany model jest przydatny do badania skuteczności różnych leków w leczeniu zespołu suchego oka.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Przygotowanie zwierząt

UWAGA: Fragmenty systemu gruczołu łzowego oczodołu są wstrzykiwane.

1. Uspokoić króliki acepromazyną w dawce 0,2 mg/kg podskórnie.
2. Odetnij sierść w okolicy okołooczodołowej i skóry głowy i całkowicie usuń wszelkie pozostałości futra za pomocą Naira. Pozostaw skórę całkowicie gładką, aby uzyskać lepszą wizualizację anatomicznych cech charakterystycznych i wstrzyknięcie konkanawaliny A pod kontrolą USG (ryc. 1).
3. Wywołaj umiarkowaną sedację, jak opisano powyżej.

2. Wstrzyknięcie gruczołu łzowego górnego oczodołu (OSLG)

UWAGA: OSLG pojawia się w szybkim tempie.

1. Zastosuj przyśrodkowy nacisk na kulę ziemską, powodując wysunięcie OSLG z tylnego nacięcia. Przyłóż przyśrodkowy nacisk na kulę ziemską (ryc. 2, czerwona strzałka) za pomocą wypukłości OSLG od tylnego nacięcia. Wypukłość służy jako lokalizacja brutto w celu znalezienia tylnego nacięcia.
2. Użyj zakrzywionych kleszczy z zamkniętymi końcówkami, aby wciąć obszar, aż wyczujesz kostny otwór w czaszce. Będzie to podobne do szczeliny z kierunkiem przednim/tylnym pod wypukłością.
3. Zastosuj niewielki nacisk kleszczami, aby pozostawić wgłębienie w skórze, które posłuży jako punkt orientacyjny do umieszczenia igły (ryc. 3A).
4. Wbić igłę (strzykawkę tuberkulinową z igłą o rozmiarze 27, 5/8 cala) prostopadle do skóry nad znakiem wgłębienia (ryc. 3B) ~ 1/4 cala do nacięcia, a następnie przekierować igłę do tyłu i na zewnątrz w kierunku bocznego kantu, dążąc do punktu środkowego między miejscem wstrzyknięcia a kostną krawędzią oczodołu.
   nuta: Jeśli nacięcie nie jest precyzyjnie wymierzone igłą, czaszka blokuje jego postęp.
5. Po dotarciu do piasty igły powoli wstrzyknąć 1000 μg Con A w objętości 0,2 ml (Rysunek 3C).
6. Zakończ wstrzykiwanie zarówno PSLG, jak i OSLG w ciągu 2-3 minut
7. Usunąć zwierzę z sedacji izofluranem (jeśli jeszcze tego nie zrobiono). Wstrzyknięcie gruczołu łzowego dolnego (ILG) można zwykle wykonać bez dalszej sedacji.

Wyniki

Rycina 1: Przygotowanie królika do wstrzyknięć konkanawaliny A.(A) Małe nożyce są używane do usuwania sierści, co pozwala na łatwiejszą wizualizację punktów orientacyjnych w celu identyfikacji górnego gruczołu łzowego. (B) Nair służy do usuwania włosów, które pozostały po strzyżeniu.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Obiektyw makro 100 mm	Canon EF 100mm f/2.8L IS USM	Numer katalogowy: 3554B002
Igły o rozmiarze 26 (5/8)	Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, Nowy Jork	305115	Igły do wstrzykiwania ConA do Gruczoły łzowe
Igły o rozmiarze 27 (5/8)	Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, Nowy Jork	305921	Igły do wstrzykiwania ConA do Gruczoły łzowe
Aceproinj (acepromazyna)	Henry Schein Zdrowie Zwierząt, Dublin, Ohio	NDC11695-0079-8	0,1 ml/kg wstrzyknięcie podskórne Do sedacji królika
Waporyzator anestezjologiczny	VetEquip, Pleasanton, Kalifornia	Przedmiot #911103
Kleszcze biskupa Harmona	Bausch i Lomb (Storz), Bridgewater w stanie New Jersey	E1500-C	Kleszcze do tkanek
Zacisk	Bausch i Lomb (Storz), Bridgewater w stanie New Jersey	E-2404	Suwmiarka służąca do pomiaru długości igły podczas iniekcji ConA
Konkanawalina A	Sigma, St. Louis, Missouri	Rok 2010	Zrobić 5 mg / ml w PBS do wstrzykiwań do gruczołów łzowych królika
Królik, Nowa Zelandia Biały lub Holenderski z pasami (zgodnie z opisem w tekście)	Charles River Labs, Waltham, Massachusetts	2-3 kg	Zwierzęta badawcze
Lupy chirurgiczne +1.50	Projekty dla Vision, Bohemia, NY	Przedmiot specjalistyczny	Zapewnij powiększenie ocznej powierzchni podczas obserwacji łez i wykonuje Concanavalin A Wstrzykiwań.

powiedział: