Generowanie modelu raka wątroby królika: zabieg chirurgiczny polegający na wszczepieniu tkanki nowotworowej w lewym płacie wątroby w celu indukcji raka wątrobowokomórkowego

Streszczenie

Źródło: Khabbaz, R. C. et al. Opracowanie i angiograficzne zastosowanie modelu VX2 królika w raku wątroby. J. Vis. Exp. (2019)

W tym filmie pokazujemy chirurgiczne wszczepienie tkanki nowotworowej do wątroby królika w celu wywołania raka wątrobowokomórkowego. Procedura pomaga w stworzeniu wiarygodnego modelu zwierzęcego do badania zachowania guza i rozwoju terapii lokoregionalnych ukierunkowanych na nowotwory wątroby.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Implantacja guza wątroby za pomocą laparotomii

1. Przygotuj królika biorcę do laparotomii. W razie potrzeby znieczulić królika biorcę za pomocą 45 mg/kg ketaminy i 5 mg/kg ksylazyny, a następnie intubacji i leczenia podtrzymującego izofluranem w ilości 1%-3%. Gdy królik jest znieczulony, ogol miejsce operacji za pomocą maszynki do strzyżenia włosów. Oczyść obszar nacięcia, przemywając go trzykrotnie peelingiem betadynowym, 70% roztworem etanolu i roztworem betadyny, a następnie udrapuj brzuch w sterylny sposób chirurgiczny.
2. Używając ostrza #15, zainicjuj laparotomię, wykonując małe pionowe nacięcie linii środkowej w dół przez skórę królika, zaczynając od wyrostka mieczykowatego. Powinno to być łatwo wyczuwalne palpacyjnie i zwykle jest mniej więcej wielkości amerykańskiego pensa. Zobacz rysunek 1.
3. Odbij skórę i zidentyfikuj kresę białą. Powinien to być odblaskowy biały pas tkanki przemieszczający się niżej w linii środkowej. Użyj rozwarstwienia, aby przejść przez linię białą i odsłonić otrzewną. Zobacz rysunek 2.
   nuta: Otrzewną można łatwo zidentyfikować, ponieważ będzie ona bezpośrednio przylegać do jelita, które można zobaczyć poruszające się wraz z oddychaniem.
   ostrożność: Otrzewna ma tendencję do przylegania do leżącego poniżej jelita ze względu na napięcie powierzchniowe. Użycie urazu do wypreparowania kresy białej pomaga zmniejszyć ryzyko perforacji jelita leżącego pod spodem.
4. Po odsłonięciu otrzewnej ostrożnie ją przepreparuj, aby dostać się do jamy otrzewnej. Wątrobę można teraz zidentyfikować. Aby lepiej poruszać się po przestrzeni brzusznej, przedłuż nacięcie linii środkowej o 1–2 cm niżej przez skórę, mięśnie i otrzewną.
   nuta: Przedłużenie nacięcia linii środkowej można łatwo i bezpiecznie wykonać, ostrożnie wprowadzając zakrzywiony hemostat do przestrzeni otrzewnej z zakrzywioną końcówką skierowaną powierzchownie w kierunku otrzewnej. Następnie lekko otwórz hemostat i użyj ostrza, aby przeciąć tkankę między dwoma ramionami hemostatu.
5. Zidentyfikuj lewy płat wątroby, aby wybrać miejsce do implantacji guza. Lewy płat jest dolno-boczny w stosunku do płata przyśrodkowego, który znajduje się w linii środkowej.
6. Przed próbą wyciągnięcia wątroby z przestrzeni otrzewnej umieść suchy kawałek gazy w dolnej części nacięcia.
   nuta: Gaza zapewni przylegającą powierzchnię, na której można położyć wątrobę, aby zapobiec jej cofaniu się z powrotem do brzucha.
7. Za pomocą atraumatycznych kleszczy lub kawałka mokrej gazy na palcach ostrożnie wyciągnij lewy płat wątroby z jamy brzusznej przez nacięcie i połóż go na umieszczonej wcześniej suchej gazie. Zobacz rysunek 3.
   ostrożność: Torebka wątroby jest wrażliwa i może łatwo pęknąć. Bardzo ważne jest, aby zachować ostrożność podczas obchodzenia się z tym narządem, aby zapobiec krwawieniu z torebki, siniakom wątroby i/lub ewentualnemu hemoperitoneum.
   nuta: Zwykle wątroba deklaruje się wizualnie po wejściu do przestrzeni otrzewnej; Jeśli jednak żołądek królika jest rozdęty, wątroba może zostać wypchnięta czaszkowo poza pole widzenia. W takim przypadku delikatnie unieś ścianę brzucha za pomocą sondy. W tym scenariuszu wątroba ma tendencję do przylegania do brzusznego aspektu przepony ze względu na napięcie powierzchniowe, więc ostrożnie oddziel wątrobę za pomocą sondy i powinna się odłączyć. Następnie użyj atraumatycznych kleszczy, aby wyciągnąć wątrobę.
8. W tym momencie przygotuj tkankę nowotworową do implantacji i umieść kawałek mokrej gazy na wątrobie, aby ją chronić.
9. Wybierz 1\u20122 mm³ kawałek wstępnie przetworzonej tkanki nowotworowej do implantacji do wątroby. Zobacz rysunek 4.
10. Za pomocą ostrza #11 nakłuj tkankę wątroby pod kątem 45°, tworząc kieszeń o głębokości 0,5 cm, uważając, aby nie przebić się przez grzbietową stronę torebki wątroby. Po wykonaniu nakłucia pozostaw ostrze na miejscu. Zobacz rysunek 5.
11. Delikatnie unieś ostrze w kierunku brzusznym, aby utworzyć małą kieszeń w łożysku wątroby. Weź kawałek guza za pomocą kleszczy, umieść kawałek guza w tej kieszeni, a następnie wyjmij ostrze.
    nuta: Ostrze można usunąć przed włożeniem fragmentu guza, jednak wątroba będzie krwawić, co może zasłaniać miejsce nakłucia, utrudniając identyfikację.
    ostrożność: Pamiętaj, aby zminimalizować kontakt guza z innymi strukturami, aby zapobiec niezamierzonemu wysiewowi guza. Można tego również uniknąć, odkładając na bok wszelkie narzędzia używane do pomocy przy implantacji po jej wszczepieniu.
12. W tym momencie umieść kawałek środka hemostatycznego, takiego jak pianka żelowa, na kieszonce guzowej, aby promować hemostazę i zapobiec wyrzuceniu kawałka guza
.
13. Wróć wątrobę do jamy brzusznej, po potwierdzeniu hemostazy.
14. Zamknąć ścianę brzucha szwem 3-0 polidioksanonu na igle stożkowej za pomocą prostego ściegu ciągłego i zamknąć skórę szwami 4-0 poliglaktyny 910 na igle tnącej za pomocą ciągłego ściegu podskórnego.
    ostrożność: Podczas zamykania ściany brzucha należy uważać, aby nie uszkodzić sieci ani innych struktur jelitowych podczas rzutu szwem.

Wyniki

Ryc. 1: Odsłonięty wyrostek mieczykowaty. Skóra i leżące pod nią mięśnie zostały odbite, aby umożliwić wizualizację wyrostka mieczykowatego (strzałka) i jelita (biała strzałka). Biała gwiazda oznacza kierunek czaszki.

Ryc. 2: Linea alba. Pokrywająca ...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Maszynki do strzyżenia włosów	Wahl	Numer telefonu 41870-0438
Ketamina	Henryk Schein	Numer katalogowy: 56344
Ksylazyna	Akorn powiedział:	Nr kat. 59399-110-20
Zakrzywiony hemostat	Wskaźnik WPI	501288
Kleszcze atraumatyczne	Sklar	Nr kat. 52-5077
gaza	Linia medline	NON21430LF
15 ostrzy	Steris powiedział:	02-050-015
11 ostrzy	Steris powiedział:	02-050-011
Surgicel	Etyka	Rok 1951
3-0 PDS/Stożek	Etyka	Z305H
4-0 Vicryl/Cięcie	Etyka	Zobacz materiał J392H