Ocena perfuzji naczyń za pomocą angiografii: technika wprowadzania środka kontrastowego w aorcie zstępującej w celu wizualizacji perfuzji naczyń krwionośnych w modelu królika

Streszczenie

Źródło: Sligar, A. D et al., Przedkliniczny model niedokrwienia kończyn tylnych u królików z cukrzycą. J. Vis. Exp. (2019).

Ten film opisuje technikę wykonywania angiografii poprzez wstrzykiwanie środka kontrastowego do aorty zstępującej, aby uwidocznić perfuzję naczyń krwionośnych w modelu królika. Ta technika pomaga zrozumieć perfuzję w naczyniach krwionośnych z blokadami i po leczeniu podczas rekonwalescencji.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz komisję weterynaryjną JoVE.

1. Przygotowanie królika do zabiegu

1. Znieczulić królika za pomocą 20–40 mg/kg ketaminy i 2 mg/kg midazolamu we wstrzyknięciu podskórnym. Umieść królika na 1,5%-3% izofluranu (zwykle 2%) podczas początkowej sedacji za pomocą maski. Należy wykonać wstrzyknięcie alfaksonu w celu podtrzymania znieczulenia poprzez wstrzyknięcie domięśniowe w dawce 3 mg/kg mc.
2. Po znieczuleniu zdejmij maskę i włóż rurkę dotchawiczą z mankietem do dróg oddechowych i podłącz do respiratora. Kontynuuj podawanie izofluranu w dawce 1,5%-3%.
3. Zbierz krew z tętnicy centralnej z dowolnego ucha w celu uzyskania podstawowego panelu biochemicznego.
4. Umieść cewnik do żył usznych 22 G w bocznej żyle usznej, aby kroplówka z roztworem Lactated Ringer's Solution była podawana przez cały czas trwania zabiegu chirurgicznego. Alternatywnie można użyć soli fizjologicznej (0,9% chlorku sodu).
5. Używając żyły bocznej w uchu przeciwległym, umieścić cewnik w żyle i podać alfaksalone w dawce 6 mg/kg/h. Stopniowo zwiększaj dawkę alfaksonu do 8 mg/kg mc./godz., jednocześnie zmniejszając izofluran do 0,6% w okresie przygotowawczym.
6. W celu ograniczenia bólu i ryzyka infekcji należy podawać buprenorfinę (0,01 mg/kg) i enrofloksacynę (5 mg/kg) we wstrzyknięciu podskórnym za pomocą igły 25 G.
7. Przytnij włosy na szyi, prawej i lewej wewnętrznej stronie ud oraz z tyłu za pomocą maszynki do strzyżenia (ostrze #40). Włosy są usuwane z tyłu, aby utrzymać kontakt z podkładką uziemiającą.
8. Umieść mankiet do pomiaru ciśnienia krwi na każdej z tylnych kończyn i zmierz początkowe ciśnienie krwi. Umieść mankiet tuż pod kolanem z sondą tuż nad stawem skokowym na bocznej powierzchni.
9. Ułóż królika na stole operacyjnym na grzbiecie i wyszoruj oraz udrapuj miejsca operacji. Obejmuje to szyję w przypadku dostępu do tętnicy szyjnej i wewnętrzną stronę prawego uda w przypadku dostępu do tętnicy udowej. Wykonaj peeling sterylizacyjny za pomocą naprzemiennych peelingów z 2% chlorheksydyny i 70% alkoholu etylowego. Powtórz to trzy razy, a następnie nałóż ostatni spray z 2% roztworem chlorheksydyny.
10. Umieść 3-milimetrową kulkę ze stali nierdzewnej, która została wysterylizowana, w torbie z polietylenu o niskiej gęstości, na prawej (szorowanej) nodze w pobliżu górnej części uda, aby służyła jako odniesienie rozmiaru podczas pomiarów angiogramu. Umieść sterylną serwetkę na nodze do czasu zabiegu. Pozostaw piłkę w sterylnej plastikowej torbie podczas pierwszego angiogramu.

2. Angiografia

1. Odsłonić prawą tętnicę szyjną wspólną
   1. Wykonaj nacięcie o długości 4–5 cm tuż obok tchawicy za pomocą skalpela z ostrzem #15.
   2. Użyj rozwarstwienia, aby odsłonić tętnicę szyjną i otwórz nacięcie za pomocą małych zwijaczy Weitlanera. Ostrożnie odizoluj tętnicę szyjną od żyły szyjnej i nerwu błędnego. Zazwyczaj do rozwarstwienia używa się zakrzywionych nożyczek Metzenbauma i zakrzywionego hemostatu komara. Upewnij się, że tętnica szyjna jest całkowicie oddzielona od nerwu i żyły szyjnej, aby ligatury tylko podwiązywały tętnicę.
2. Umieść ligaturę za pomocą jedwabnego szwu 4-0 na bliższych i dalszych końcach odsłoniętej tętnicy. Zawiąż dystalny koniec tętnicy szyjnej węzłem chirurgicznym, a następnie czterema kwadratowymi węzłami. Na bliższym końcu użyj ligaloopa, aby umożliwić jego dokręcenie lub poluzowanie w razie potrzeby. Użycie ligaloopa umieszczonego na bliższym końcu odsłoniętej tętnicy może pomóc w zabezpieczeniu wprowadzacza i cewnika.
3. Podawać 500 j.m. heparyny przez dożylny. Użyj około 0,5 ml 1% lidokainy nałożonej wzdłuż odsłoniętej tętnicy szyjnej, aby rozszerzyć naczynie. Zazwyczaj wystarcza jeden zabieg, ale w razie potrzeby można go powtórzyć. Przetnij mniej więcej połowę tętnicy szyjnej za pomocą skalpela lub nożyczek do tęczówki, a następnie umieść 4-calowe narzędzie do wprowadzania drutu w tętnicy.
4. Przeprowadź prowadnik o wymiarach 0,014 cala x 185 cm przez narzędzie do wprowadzania do rozwidlenia aorty w grzebieniu biodrowym w aorcie zstępującej. Wyjmij narzędzie do wprowadzania i włóż cewnik angioograficzny 3F z warkoczem przez przewód.
5. Przesuń cewnik warkocza tak, aby znajdował się 2 cm proksymalnie do rozwidlenia aorty w grzebieniu biodrowym w aorcie zstępującej.
6. Umieść końcówkę cewnika między siódmym kręgiem lędźwiowym a pierwszym kręgiem krzyżowym. Sprawdź położenie cewnika, ręcznie wstrzykując 2–4 ml środka kontrastowego.
7. Podać dotętnicze wstrzyknięcie 100 μg nitrogliceryny przez cewnik w celu zwiększenia rozszerzenia naczyń krwionośnych.
8. Podaj 0,8 ml 1% lidokainy królikowi przez cewnik, aby pomóc w rozszerzeniu naczyń krwionośnych podczas angiogramu. Podłącz rurkę wtryskiwacza do cewnika i usuń wszelkie pęcherzyki powietrza z przewodu. Wstrzyknąć 8-9 ml środka kontrastowego za pomocą automatycznego iniektora angiograficznego przez cewnik.
9. Rejestruj seryjne obrazy kończyn tylnych za pomocą angiografii.
   1. Ustaw wtryskiwacz mocy tak, aby wstrzykiwał kontrast na poziomie 3 ml/s, co daje łącznie 8-9 ml. Wykonaj cyfrową angiografię subtrakcyjną z prędkością 6 klatek na sekundę.
   2. Wybierz utworzone obrazy seryjne i zmień zdjęcie każdego angiogramu, używając ustawienia około -40%, aby zminimalizować wygląd kości i uchwycić pełny obraz perfuzji naczynia z kontrastem. Przykładowy angiogram przepływu naczyniowego po podwiązaniu/wycięciu tętnicy udowej przedstawiono na rycinie 1.

Wyniki

Rycina 1: Angiogramy kończyny tylnej królika z cukrzycą i bez cukrzycy przed operacją, po operacji i po powrocie do zdrowia przez 70 dni po podwiązaniu i wycięciu tętnicy udowej. (A) Angiogram kończyny niedokrwiennej (po lewej) i kończyny kontrolnej przeciwległej (po prawej). (B) Powiększony obraz kończyny niedokrwiennej w miejscu podwiązania.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Sprzęt do angiografii	Toshiba	Infinix-i
Prowadnica prowadnika	Bostoński Naukowy	39122-01
Narzędzie do wstawiania	Systemy medyczne Merit	Płyta MAP550	Narzędzie do wkładania drutu metalowego
Lidokainy	McKesson Medyczno-Chirurgiczny	239936
Ligaloop (Ligaloop	V. Mueller	kanał CH117 / kanał CH116	Biały Mini / Żółty Mini
Cewnik warkoczowy	Systemy medyczne Merit	Numer katalogowy: 1310-21-0053	Warkocz 3F
Szwy jedwabne	Firma Ethicon-Johnson & Johnson	A183H	4-0 Krawaty jedwabne 18"
Pompa strzykawkowa	DRE Weterynaria		Versaflow VF-300
Środki kontrastowe Visipaque	McKesson Medyczno-Chirurgiczny	509055
Wtryskiwacz do angiografii	Medrad

)