Generowanie króliczego modelu infekcji kości: technika wywoływania przewlekłej infekcji poprzez wstrzykiwanie bakterii bezpośrednio do szpiku kostnego

Streszczenie

Źródło: Zhang, Y i wsp., Leczenie siarczanem wapnia naładowanym wankomycyną i autogenną kością w ulepszonym króliczym modelu infekcji kości. J. Vis. Exp. (2019).

Ten film opisuje technikę chirurgicznego wywoływania infekcji bakteryjnej w szpiku kostnym królika za pomocą wosku kostnego, aby uniknąć wycieku bakterii. Ten model królika może być wykorzystany do badania leczenia infekcji kości i regeneracji kości.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz komisję weterynaryjną JoVE.

1. Przygotowanie modeli infekcji kości

1. Trzymanie samców białych królików nowozelandzkich w wieku 3 miesięcy w oddzielnych klatkach, w kontrolowanych warunkach powietrza (20 ± 1 °C) i 12 godzinach/12 godzinach w jasnym i ciemnym oświetleniu. Oferuj rutynową dietę i codzienną wodę z kranu.
2. Upewnij się, że w czasie operacji królik waży więcej niż 3 kg.
3. Znieczulenie królików należy podać dootrzewnowo z pentobarbitalem sodu (3 mg na 100 g masy ciała). Upewnij się, że króliki są w pełni znieczulone przez brak reakcji na uszczypnięcie łapy. Zamocuj króliki na stole operacyjnym podczas procedury operacyjnej.
   UWAGA: Upewnij się, że czas trwania procedury modelowania jest krótszy niż 1 godzina.
4. Ogol proksymalny obszar piszczeli za pomocą golarki elektrycznej w kierunku przeciwnym do kierunku wzrostu włosów. Zdezynfekuj skórę, nakładając roztwór jodu powidonu.
5. Zaznacz górny koniec kości piszczelowej i pozycję otworu do wiercenia do wstrzyknięcia za pomocą S. aureus (odległość do górnego końca kości piszczelowej wynosi 1,5 cm) długopisem i linijką. Upewnij się, że otwory do wiercenia znajdują się poziomo w środku płaskowyżu piszczelowego (Rysunek 1A).
6. Przeciąć skórę piszczeli za pomocą skalpela nr 11 i wykonać 1 cm nacięcie w okostnej (ryc. 1B, C). Wybij otwór w kości piszczelowej o średnicy 2 mm za pomocą elektrycznej wiertarki do kości (Rysunek 1D).
7. Naciśnij otwory o średnicy 2 mm w płaskowyżu piszczelowym za pomocą cylindra z wosku kostnego o średnicy 2 mm i wysokości 2 mm (ryc. 1E). Usuń zapasowy wosk kostny wzdłuż płaszczyzny poziomej płaskowyżu piszczelowego (ryc. 1F). Sprawdź, czy otwór o średnicy 2 mm jest wypełniony woskiem kostnym (Rysunek 1G).
   nuta: Upewnij się, że otwory są pełne wosku kostnego, sprawdzając otwór z przelewem krwi lub bez.
8. Zszyj okostną i skórę wchłanialnym szwem chirurgicznym w pionowym szwie materacowym, aby zapobiec żuciu szwów przez zwierzę (ryc. 1H).
9. Wstrzyknąć 1 x 10⁸ jtk/ml roztworów S. aureus (30 μl na 100 g masy ciała) za pomocą wstrzykiwacza do aseptyki o pojemności 1 ml (ryc. 1I). Upewnij się, że igły wnikają w wosk kostny i powoli wstrzykuj roztwór S. aureus do szpiku kostnego.
10. Trzymaj zwierzę w ciepłych i czystych warunkach, aby uniknąć utraty ciepła po modelowaniu. Monitoruj częstość oddechów i tętno. Po przebudzeniu trzymaj króliki w indywidualnych klatkach ze swobodnym dostępem do jedzenia i wody.

Wyniki

Rysunek 1. Chirurgiczne opracowanie modelu zakażenia kości.(A) Pokazuje pozycję uderzenia na kości piszczelowej. Odległość między położeniem otworu wiertniczego do wstrzykiwania S. aureus a górnym końcem kości piszczelowej wynosi 1,5 cm. (B) Nacięcie wykonane w skórze w celu odsłonięcia okostnej. (C) Pokazuje nacięcie wykonane przez okostną...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
wchłanialny szew chirurgiczny	Jinghuan powiedział:	Zobacz materiał 18S0604A
Wtryskiwacz aseptyczny	Jinglong (Dżingdług)	20170501
wosk kostny	ETYKA	JH5CQLM
Elektryczna wiertarka do kości	Bao Kang	BKZ-1
Golarka elektryczna	Kody	3800
Króliki nowozelandzkie białe	Centrum Zwierząt Doświadczalnych w Zhejiang	SCXK 2014-0047
Skalpel nr 11	Prowincja Yuanlikang	20170604
pentobarbital sodu	Merk	2070124
Proszek do liofilizacji S. aureus	Chińskie Ogólne Centrum Zbierania Kultur Mikrobiologicznych	Zobacz materiał ATCC 6538