Inaktywacja genu docelowego oparta na systemie CreER-LoxP: indukowany tamoksyfenem system rekombinazy Cre do docelowego nokautu genu w modelu mysim

Streszczenie

Źródło: Hübner, E. K., et al. Konstytutywne i indukowalne systemy do genetycznej modyfikacji hepatocytów myszy in vivo za pomocą hydrodynamicznej iniekcji żyły ogonowej.J. Vis. Exp. (2018)

Ten film opisuje procedurę nokautu genu docelowego za pomocą systemu rekombinazy Cre indukowanego tamoksyfenem po dootrzewnowym wstrzyknięciu tamoksyfenu w modelu mysim.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Indukcja transfekowanego CreER za pomocą tamoksyfenu

UWAGA: Tamoksyfen jest szkodliwy, może działać na raka lub uszkadzać płodność. Proszę zapoznać się z kartą charakterystyki.

1. Zaplanuj dootrzewnowe wstrzyknięcia tamoksyfenu przez trzy kolejne dni.
2. W dniu 1 rozpuść 10 mg tamoksyfenu w 40 μl etanolu. Inkubować w temperaturze 55 °C przez 10 minut. Wirować kilka razy, aż tamoksyfen się rozpuści.
3. Dodaj 960 μl oleju kukurydzianego. Inkubować przez 5 minut w temperaturze 55 °C. Kilkakrotnie przemieszać, aby uzyskać klarowny roztwór.
4. Przygotować roztwór w strzykawce insulinowej o pojemności 1 ml z igłą 27 G.
5. Chropij mysz, ostrożnie chwytając szyję myszy kciukiem i drugim palcem, mocując ogon między podstawą dłoni a czwartym i piątym palcem.
6. Wstrzyknąć 0,1 ml (= 1 mg tamoksyfenu) roztworu dootrzewnowo w lewy dolny kwadrant jamy brzusznej.
7. Powtórz wstrzyknięcia w drugim i trzecim dniu.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Injekt Strzykawka F 1 ml	Braun	9166017V	Do wstrzykiwań dootrzewnowych
Tamoksyfen	Sigma-Aldrich	T5648-1G	Do aktywacji CreER
Olej kukurydziany	Sigma-Aldrich	Zobacz materiał C8267-500ML	Nośnik do wstrzykiwań tamoksyfenu