Method Article

Izolacja limfocytów T oparta na flotacji przy użyciu sortowania komórek aktywowanych wyporem

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Snow, T., et al. Izolacja, aktywacja i ekspansja limfocytów T opartych na flotacji z próbek ludzkich komórek jednojądrzastych krwi obwodowej przy użyciu mikropęcherzyków. J. Vis. Exp. (2022)

Ten film pokazuje izolację limfocytów T z komórek jednojądrzastych krwi obwodowej (PBMCs) przy użyciu technologii funkcjonalizowanego sortowania komórek aktywowanych wypornością (BACS). Technika izolacji polega na pozytywnej selekcji limfocytów T CD3 + poprzez znakowanie komórek biotynylowanymi przeciwciałami anty-CD3 i oddzielenie komórek związanych z przeciwciałami za pomocą mikropęcherzyków związanych streptawidyną.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Izolacja limfocytów T za pomocą mikropęcherzyków za pomocą selekcji pozytywnej

UWAGA: Ten protokół szczegółowo opisuje podejście do pozytywnej selekcji CD3+ na małą skalę przy użyciu SAMB.

  1. Inkubować 3 x 108 komercyjnie uzyskanych PBMC w 2,5 ml buforu separacyjnego z biotynylowanym przeciwciałem anty-CD3 (OKT3) w stężeniu 25 ng przeciwciała na 1 milion komórek (25 ng / M). Delikatnie wymieszać, pipetując w górę i w dół, i inkubować w temperaturze pokojowej przez 10 minut.
  2. Dodać mikropęcherzyki streptawidyny (SAMB) w stosunku 0,5 (ilość SAMB):1 (ilość komórek) zg....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Przeciwciało anty-ludzkie CD3 (OKT3) z biotynąLegenda biologicznaNumer katalogowy: 317320
LeukopakBioIVT (Kształcenie i RozwójHUMANLMX100-0001129
Normalne ludzkie PBMCBioIVT (Kształcenie i RozwójHUMANHLPB-0002562
Zestaw mikropęcherzyków streptawidyny (zawiera bufor separacyjny Akadeum)AkadeumNumer katalogowy 11110-000
powiedział: T T powiedział:

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Buoyancy Activated Cell SortingT Cell IsolationMicrobubble SeparationCD3 Antibody LabelingStreptavidin MicrobubblesPeripheral Blood Mononuclear CellsPositive Cell SelectionCentrifugation SeparationCell Surface MarkersImmune Cell Isolation

Related Articles