Metoda preparacji w celu pobrania mysich węzłów chłonnych drenujących podkolanowe do obrazowania ex vivo

Streszczenie

Źródło: Rezende, R. M., et al. Wizualizacja struktury węzłów chłonnych i lokalizacji komórkowej za pomocą mikroskopii konfokalnej ex-vivo. J. Vis. Exp. (2019 rok)

Ten film demonstruje technikę preparacji w celu pobrania węzłów chłonnych drenujących podkolanowe z tylnych nóg myszy. Węzły chłonne odgrywają kluczową rolę w łączeniu odporności wrodzonej i nabytej, a pobieranie nienaruszonych węzłów chłonnych – z zachowaną strukturą tkankową i żywotnością komórek – może pomóc w badaniu miejscowych i ogólnoustrojowych odpowiedzi immunologicznych.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Zabieg chirurgiczny mający na celu usunięcie węzła chłonnego drenującego podkolanowy

1. Eutanazja myszy za pomocą uduszenia CO_{2 ,} a następnie zwichnięcia szyjki macicy.
2. Unieruchom myszy w pozycji leżącej na akrylowej scenie za pomocą taśmy klejącej i nałóż olej mineralny za pomocą bawełnianego wacika w łydkę i kolano (ryc. 1A-D).
3. Wykonaj nacięcie w linii środkowej łydki od pięty do kolana (ryc. 1E, F).
4. Oddziel mięśnie łydki od skóry (ryc. 1F, G).
5. Odsłoń dół podkolanowy (ryc. 1G). Węzeł chłonny podkolanowy pojawi się jako półprzezroczysta kula w dole podkolanowym.
6. Usuń węzeł chłonny podkolanowy za pomocą zakrzywionych kleszczy mikrochirurgicznych (ryc. 1G).
7. Alternatywnie, obróć mysz w pozycji leżącej na plecach i zbliż się do dołu podkolanowego między mięśniem dwugłowym uda a mięśniem półścięgnistym w celu usunięcia LN podkolanowego, wykonując nacięcie linii środkowej łydki od pięty do kolana, a następnie dysocjację mięśni łydki od skóry.
   nuta: Dół podkolanowy to płytkie zagłębienie zlokalizowane w tylnej części stawu kolanowego. Otwórz ostrożnie, aby zobaczyć węzeł chłonny podkolanowy.

Wyniki

Rycina 1: Przygotowanie węzłów chłonnych podkolanowych. (A, B) Podskórne wstrzyknięcie głównej mieszanki przeciwciał FACS do opuszki łapy. (C, D) 3 godziny po wstrzyknięciu należy poddać mysz eutanazji, unieruchomić mysz na akrylowej płytce za pomocą taśmy klejącej (C) i nałożyć olej mineralny na skórę brzucha, aby zapobiec osadzaniu się sierści wokół nacięcia (D)....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Naczynie hodowlane Cellview	Greiner-Bio	627861	35x10 mm ze szklanym dnem
Chusteczki Kimwipes	Marka Naukowa Kimtech	7557 Rozdział 7557	Rozmiar 21 x 20 cm / 100 arkuszy w pudełku
Zakrzywione kleszcze mikrochirurgiczne	Instrumenty chirurgiczne WEP	Zamówienie	12,5 cm
Zakrzywione nożyczki mikrochirurgiczne	Instrumenty chirurgiczne WEP	Zamówienie	11,5 cm