Kaniulacja krezki limfatycznej w modelu szczura w celu pobrania płynu limfatycznego

Streszczenie

Źródło: Trevaskis, N. L., et al. Model szczura kaniulowanego w kaniulowanym przewodzie chłonnym krezki: zastosowanie do oceny transportu leków limfatycznych w jelitach. J. Vis. Exp. (2015).

Ten film demonstruje technikę kanniulacji krezkowego przewodu chłonnego u szczurów. Metoda ta umożliwia bezpośredni dostęp do całej objętości składników obecnych w płynie limfatycznym.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Kaniulacja krezkowego przewodu chłonnego

1. Ułóż zwierzę prawą stroną skierowaną w stronę operatora. W razie potrzeby wykonaj operację z pomocą mikroskopu operacyjnego lub bez niej.
2. Otwórz górną warstwę ściany mięśnia brzucha z prostym 4-centymetrowym nacięciem rozciągającym się od linii środkowej (wyrostek mieczykowaty) do prawego boku około 2 cm poniżej klatki piersiowej (brzeg żebrowy) za pomocą sterylnego ostrza skalpela (patrz ryc. 1B).
3. Otwórz pozostałe warstwy ściany mięśni brzucha od 4 - 5 mm bocznie do linii środkowej do prawej flanki za pomocą małej pary nożyczek chirurgicznych (patrz ryc. 1B).
4. Cofnij jelito cienkie pod lewą ścianę mięśnia brzucha i utrzymuj je na miejscu za pomocą 2-3 kawałków sterylnej gazy nasączonej zwykłą solą fizjologiczną.
5. Umieść szczura nad plastikową strzykawką o pojemności 10 ml umieszczoną poziomo pod grzbietem szczura na poziomie prawej nerki, aby ułatwić wizualizację krezkowego przewodu chłonnego.
6. Zlokalizuj górny kanał chłonny krezkowy: naczynie o średnicy około 0,5 - 1 mm, które jest prostopadłe do prawej nerki i bezpośrednio rostralne i równoległe do tętnicy krezkowej (pulsujące ciemnoczerwone naczynie krwionośne; patrz ryc. 1C).
   UWAGA: U szczurów bez postu lub szczurów, którym podawano olej, naczynie jest białe, nieprzezroczyste i łatwiejsze do wizualizacji niż u szczurów na czczo, u których jest dość przezroczyste.
7. Sprawdź obszar bezpośrednio ogonowy do dużego górnego przewodu chłonnego krezki i tętnicy krezkowej, aby ustalić, czy obecny jest drugi, mniejszy dodatkowy przewód limfatyczny. Jeśli występuje, zablokuj przepływ limfy przez przewód, przecinając przewód i zamykając go klejem superglue lub zawiązując szew wokół kanału, aby upewnić się, że cała objętość limfy wypływającej z jelita jest pobierana z górnego przewodu chłonnego krezkowego.
8. Przełóż parę prostych kleszczy przez łożysko tłuszczowe okołonerkowe na dolnym brzegu prawej nerki i przez warstwy tkanki łącznej bezpośrednio poniżej żyły głównej, w kierunku równoległym do górnego kanału chłonnego krezki.
9. Za pomocą końcówki kleszczy chwyć kaniulę limfatyczną i przeciągnij ją przez złoże tłuszczowe wokół nerek, jednym końcem bezpośrednio przylegającym do krezkowego przewodu chłonnego, a drugim zewnętrznym od zwierzęcia na poziomie prawej nerki.
10. Odizoluj krezkowy przewód chłonny od leżących nad nim warstw tkanki łącznej i tłuszczowej przez rozwarstwienie. Uważaj, aby nie przekłuć ani nie uszkodzić przewodu limfatycznego.
11. Po odizolowaniu przewodu limfatycznego wykonaj mały otwór w przewodzie limfatycznym za pomocą mikronożyczek, ostrej końcówki kleszczy jubilera lub igły 25 G. Uważaj, aby nie przeciąć całkowicie naczynia.
12. Upewnij się, że kaniula limfatyczna jest całkowicie wypełniona roztworem przeciwzakrzepowym (za pomocą strzykawki i igły 25 G) bez szczelin powietrznych. Wprowadzić kaniulę limfatyczną około 2 - 4 mm do wnętrza krezki limfatycznej przez mały otwór za pomocą małej pary kleszczy.
13. Obserwuj kaniulę limfatyczną przez kilka minut. Obserwuj stopniowy przepływ limfy jelitowej od swobodnie zbierającego końca kaniuli, jeśli kaniulacja się powiedzie. Jeśli kaniulacja się nie powiedzie, powtórz kroki 1.8 - 1.12.
14. Jeśli kaniulacja się powiedzie, zabezpiecz kaniulę, umieszczając niewielką kroplę kleju weterynaryjnego nad otworem wejściowym do przewodu limfatycznego. Należy uważać, aby nie zatkać naczynia poprzez nałożenie nadmiaru kleju weterynaryjnego.
15. Czekając, aż klej weterynaryjny stwardnieje, obserwuj przepływ limfy przez kilka minut, aby upewnić się, że procedura kaniulacji się powiodła. Po upewnieniu się o powodzeniu kaniulacji, ostrożnie usuń kawałki gazy, które zostały umieszczone w jamie brzusznej i umieść jelito cienkie w pierwotnej pozycji.
16. Wstępnie zważyć probówki do pobierania limfy, oznaczyć probówki do pobierania próbek limfy i krwi i dodać roztwór przeciwzakrzepowy. Dodać wystarczającą ilość roztworu antykoagulantu, aby osiągnąć końcowe stężenie 1 mg/ml EDTA w sterylnej wodzie lub 10 - 20 j.m./ml heparyny w pobranej limfie lub krwi.
17. Umieść probówkę do pobierania limfy zawierającą antykoagulant (krok 1.16) na końcu kaniuli, aby zebrać swobodnie płynącą limfę.
18. Następnie kanuuluj dwunastnicę w celu infuzji roztworów nawadniających i/lub preparatów.

Wyniki

Rysunek 1. Fotografie (A) brzucha ogolonego w ramach przygotowań do kaniulacji przewodu chłonnego, (B) ściany mięśniowej brzucha otwartej prostym 4 cm nacięciem rozciągającym się od linii środkowej do prawego boku, aby uzyskać dostęp do przewodu limfatycznego, oraz (C) górnego przewodu chłonnego krezkowego (w żółtym kółku) prostopadłego do prawej ne...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Sterylna sól fizjologiczna	Opieka zdrowotna Baxter	AHB 1307	Można użyć dowolnej marki. Przykładem są tutaj worki z solą fizjologiczną Baxter 100 ml, pudełko 50 sztuk
70 % etanolu w wodzie	jakikolwiek		Można użyć dowolnej marki
Roztwór glukonianu chlorheksydyny (Microshield 4)	Livingstone Międzynarodowy	JJ60243L	Można użyć dowolnej marki. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&szukaj =JJ60243L
Roztwór betadyny	Livingstone Międzynarodowy	BU0510	Można użyć dowolnej marki. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&szukaj =BU0510
Ilium Ketamil (Ketamina 100 mg / ml)	PROVET WIKTORIA	KETA I 1	http://www.provet.vom.au
Heparyna (35000I.U. w 35 ml	SigmaPharmaceuticals	Numer telefonu 337220	http://www.sigmaco.com.au
Kaniula polietylenowa (PE) o średnicy zewnętrznej 0,96 mm x średnica wewnętrzna 0,58 mm	Przedłużki do mikroprobówek	PE8050	Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest rura PE 0,96 x0,58 mm, 30 m
Kaniula polietylenowa (PE) ø zewnętrzna 0,8 mm x średnica wewnętrzna 0,5 mm	Przedłużki do mikroprobówek	PE9658	Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest rura PE 0,8 x0,5 mm, 30 m
Znaczniki	jakikolwiek		Można użyć dowolnej marki
Klej weterynaryjny	jakikolwiek		Można użyć dowolnej marki
Igły o rozmiarze 23	Livingstone Międzynarodowy	DN23GX0.75LV	Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj jednorazowa igła Livingstone, sterylna, 23GX0.75 cala, 100 / PUDEŁKO. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT= 6&szukaj=DN23GX0.75LV
Igły o rozmiarze 25	Livingstone Międzynarodowy	DN25GX1.0LV	Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj jednorazowa igła Livingstone, sterylna, 25GX1.0 cala, 100 / PUDEŁKO. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&szukaj= DN25GX1.0LV
Strzykawka 1 ml	Livingstone Międzynarodowy	T3SS01TA	Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj strzykawka Terumo 1 ml Slip Tuberculin 100/Box. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search =T3SS01TA
Strzykawka 10 ml	Livingstone Międzynarodowy	T3SS10SA	Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj strzykawka Terumo 10 ml Slip 100/Box. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&szukaj =T3SS10SA
Waciki z gazy	Livingstone Międzynarodowy	Zobacz materiał GSC075	Można użyć dowolnej marki i przyciąć ją do wymaganego rozmiaru. Przykładem są tutaj waciki z gazy wypełnione bawełną 7,5x7,5 cm, 8 warstw. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search =GSC075
Poduszka grzewcza	Ratek	Element ZAWI1	Można użyć dowolnej marki, która utrzymuje temperaturę na poziomie 37C. Przykładem jest tutaj taca do podgrzewania Ratek.
Mikroskop chirurgiczny	Zeiss	Numer telefonu 495005-0014-000	Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj mikroskop stereoskopowy Zeiss Stemi 2000-C z podwójnym punktem Stand S i diodą LED KL 300. https:// www.micro-shop.zeiss.com/? l=en&p=us&f=e&i=10143
1 x małe nożyczki chirurgiczne	Narzędzia Precyzyjnej Nauki (FST)	Numer katalogowy: 14060-09	Można użyć dowolnej marki. Przykładem są tutaj cienkie nożyczki FST, 9 cm z krawędzią tnącą 21 mm, ostre, proste. http://www.finescience.ca/ Special-Pages/Products.aspx? ProductId=40&CategoryId=17
2 x kleszcze z ząbkowaną zakrzywioną końcówką	Narzędzia Precyzyjnej Nauki (FST)	11001-13	Można użyć dowolnej marki. Przykładem są tutaj kleszczyki FST 13 cm o standardowym wzorze z zakrzywioną końcówką 2,8x1,4 mm. http://www.finescience.ca/ Special-Pages/Products.aspx? ProductId=405&CategoryId=32

powiedział: TGL powiedział: TGL