Kaniulacja śróddwunastnicza w modelu szczurzym do badań immunopatologicznych

Streszczenie

Źródło: Trevaskis, N. L. et al., Model szczura kaniulowanego w kaniulowanym przewodzie limfatycznym krezki: zastosowanie do oceny transportu leków limfatycznych w jelitach.J. Vis. Exp.(2015)

Ten film pokazuje kaniulację śróddwunastnicy na modelu szczurzym. Po znieczuleniu szczura lokalizuje się dwunastnicę i tworzy się małe nakłucie. Kaniula w kształcie litery J ze ściętą końcówką jest ostrożnie wprowadzana i zabezpieczana, a nacięcie jest zamykane. Kaniulowany model szczura umożliwia infuzję dojelitową do badań immunopatologicznych.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Przygotowania dzień przed zabiegiem chirurgicznym

1. W razie potrzeby pościć szczura w noc przed operacją. Upewnij się, że szczur ma swobodny dostęp do wody.
2. Przygotować roztwory, które mają być podane szczurowi.
   1. Przygotuj roztwór nawadniający, taki jak sterylna sól fizjologiczna lub roztwór Ringera.
   2. Przygotuj roztwory znieczulające zgodnie z wymaganiami. Środek znieczulający stosowany w opisanych tutaj eksperymentach składał się z "Koktajlu 1" przygotowanego przez połączenie 1,9 ml ketaminy 100 mg/ml, 0,5 ml ksylazyny 100 mg/ml, 0,2 ml acepromazyny 10 mg/ml i 2,5 ml soli fizjologicznej oraz "Koktajlu 2" składającego się z 1 ml ketaminy 100 mg/ml i 0,1 ml acepromazyny 10 mg/ml. UWAGA: Wziewny izofluran lub sewofluran może być preferowany, ponieważ może zapewnić chirurgiczną płaszczyznę znieczulenia przez dłuższy czas.
3. Przygotować roztwór przeciwzakrzepowy zawierający 10 mg/ml kwasu etylenodiaminotetraoctowego (EDTA) w sterylnej wodzie lub 10 j.m./ml heparyny w soli fizjologicznej w celu przepłukania kaniuli limfatycznej. Należy również przygotować roztwór antykoagulacyjny zawierający 2,5 - 10 j.m./ml heparyny w soli fizjologicznej, aby przepłukać kaniulę tętnicy szyjnej.
4. Przygotuj kaniulę polietylenową do wprowadzenia do dwunastnicy (średnica zewnętrzna 0,96 mm, średnica wewnętrzna 0,58 mm)
   1. Przyciąć kaniulę na wymaganą długość (zwykle 25 - 30 cm w przypadku kaniuli dwunastnicy) i umieścić skos na końcu kaniuli za pomocą sterylnego ostrza chirurgicznego (patrz ryc. 1).
      nuta: Zwiększa to łatwość wprowadzania kaniuli i zmniejsza częstość występowania zablokowania kaniuli po jej wprowadzeniu.
   2. Umieść punkt kotwiczenia w kształcie litery J w kaniuli śróddwunastniczej, zapętlając niewielką część kaniuli z powrotem na sobie, podgrzewając ją zapalniczką lub gorącą płytą, a następnie przycinając na wymiar (patrz rysunek 1).
5. Podłączyć kaniulę limfatyczną do igły i strzykawki o strzykawce 25 G zawierającej roztwór przeciwzakrzepowy (przygotowany w kroku 1.3). Napełnij kaniulę limfatyczną roztworem przeciwzakrzepowym i pozostaw roztwór w kaniuli na noc (O/N), aby zmniejszyć częstość tworzenia się skrzepów w kaniuli limfatycznej podczas pobierania limfy.
6. Przygotuj probówki do pobrania próbki limfy i krwi. Wstępnie zważyć probówki do pobierania limfy, oznaczyć probówki do pobierania próbek limfy i krwi i dodać roztwór przeciwzakrzepowy. Dodać wystarczającą ilość roztworu antykoagulantu, aby osiągnąć końcowe stężenie 1 mg/ml kwasu etylenodiaminotetraoctowego (EDTA) w sterylnej wodzie lub 10 - 20 j.m./ml heparyny w pobranej limfie lub krwi.

2. Przygotowania bezpośrednio przed rozpoczęciem zabiegu chirurgicznego

1. Sprawdź kaniule, przepłukując je sterylnym roztworem soli fizjologicznej lub roztworem antykoagulantu, aby upewnić się, że są opatentowane.
2. Przygotuj szczura do zabiegu chirurgicznego.
   1. Znieczulaj szczura przez cały okres operacji i pobierania próbek.
      1. Na przykład, znieczulenie należy rozpocząć poprzez podskórne wstrzyknięcie 1,5 ml/kg Koktajlu I (z kroku 1.2.2) w fałd skórny z tyłu szyi szczura za pomocą strzykawki o pojemności 1 ml przymocowanej do igły o pojemności 25 G. Utrzymać znieczulenie poprzez dootrzewnowe wstrzyknięcie 0,44 ml/kg Koktajlu 2 (od kroku 1.2.2) mniej więcej co godzinę, w zależności od potrzeb, za pomocą strzykawki o pojemności 1 ml dołączonej do igły 25 G.
      2. Przed przystąpieniem do zabiegu należy upewnić się, że głębokość znieczulenia jest wystarczająca, obserwując częstość oddechów, ruch wąsów, napięcie mięśniowe i reakcje na bodźce, takie jak szczypanie stopy. W razie potrzeby podać dodatkowe znieczulenie.
   2. Ogol sierść z obszarów chirurgicznych, które obejmują prawą stronę brzucha, w celu kaniulacji dwunastnicy.
   3. Oczyść obszary operacyjne w aseptyce za pomocą roztworu jodu powidonu lub roztworu chlorheksydyny i peelingu z 70% etanolu. Powtórz to 3 razy dla każdego regionu, kończąc końcowym oczyszczaniem za pomocą 70% etanolu.
3. Umieścić zwierzę w pozycji leżącej grzbietowej na czystym prześcieradle nad podgrzewaną podkładką chirurgiczną (37 °C).

3. Kaniulacja dwunastnicy

1. Ułóż zwierzę prawą stroną skierowaną w stronę operatora. W razie potrzeby wykonaj operację z pomocą mikroskopu operacyjnego lub bez niej.
2. Otwórz górną warstwę ściany mięśnia brzucha z prostym 4 cm nacięciem rozciągającym się od linii środkowej (wyrostek mieczykowaty) do prawego boku około 2 cm poniżej klatki piersiowej (brzeg żebrowy) za pomocą sterylnego ostrza skalpela (patrz ryc. 2B).
3. Otwórz pozostałe warstwy ściany mięśni brzucha od 4 - 5 mm bocznie do linii środkowej do prawej flanki za pomocą małej pary nożyczek chirurgicznych (patrz ryc. 2B).
4. Cofnij jelito cienkie pod lewą ścianę mięśnia brzucha i utrzymuj je na miejscu za pomocą 2-3 kawałków sterylnej gazy nasączonej zwykłą solą fizjologiczną.
5. Podłączyć kaniulę dwunastnicy do strzykawki (np. 10 ml) wypełnionej roztworem nawadniającym.
6. Zidentyfikuj dwunastnicę jako jasnoróżowy (z większą liczbą naczyń krwionośnych) odcinek jelita cienkiego, który po delikatnym pociągnięciu w dół odsłania żołądek.
7. Wykonać mały otwór do nakłucia w dwunastnicy około 2 cm poniżej połączenia żołądka i dwunastnicy (odźwiernika) za pomocą sterylnej igły 23 G.
8. Przełóż haczykowaty koniec kaniuli dwunastnicy w kształcie litery J przez otwór do nakłucia. Zabezpiecz na miejscu kroplą kleju cyjanoakrylowego.
9. Rozpocznij nawadnianie szczura, podłączając kaniulę do strzykawki nawadniającej załadowanej do pompy infuzyjnej. Według literatury tempo nawodnienia waha się od 0,5 do 3 ml/godz.
10. Po zakończeniu kaniulacji limfy i dwunastnicy należy zamknąć nacięcie w ścianie mięśnia brzucha szwami. Następnie zamknij nacięcie skóry, nakładając kilka kropel kleju tkankowego (cyjanoakrylanu) wzdłuż boku nacięcia i ściskając skórę po obu stronach nacięcia.

Wyniki

Rysunek 1. Schematyczne przedstawienie kształtu skośnej końcówki tętnicy szyjnej lub kaniuli limfatycznej oraz skośnej końcówki kaniuli dwunastnicy w kształcie litery J.

Rysunek 2. Fotografie (A) brzucha ogolonego w ramach przygotowań do kaniulacji p...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Sterylna sól fizjologiczna	Opieka zdrowotna Baxter	AHB 1307	Można użyć dowolnej marki. Przykładem są tutaj worki z solą fizjologiczną Baxter 100 ml, pudełko 50 sztuk
70 % etanolu w wodzie	jakikolwiek		Można użyć dowolnej marki
Roztwór glukonianu chlorheksydyny (Microshield 4)	Livingstone Międzynarodowy	JJ60243L	Można użyć dowolnej marki. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
Roztwór betadyny	Livingstone Międzynarodowy	BU0510	Można użyć dowolnej marki. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
Ilium Ketamil (Ketamina 100 mg / ml)	PROVET WIKTORIA	KETA I 1	http://www.provet.com.au/
Ilium Xylazil (ksylazyna 100 mg/ml)	PROVET WIKTORIA	TRO-3828	http://www.provet.com.au/
ACP 10 Wstrzyknięcie (Acepromazyna 10 mg/ml)	PROVET WIKTORIA	VTG-DACP010020	http://www.provet.com.au/
Heparyna (35000I.U. w 35 ml)	Sigma Pharmaceuticals	Numer telefonu 337220	http://sigmaco.com.au/
Kwas etylenodiaminotetraoctowy (EDTA) sól disodowa dwuwodna	Sigma-Aldrich	E1644	Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj sól disodowa EDTA firmy Sigma.
Kaniula polietylenowa (PE) o średnicy zewnętrznej 0,96 mm x średnica wewnętrzna 0,58 mm	Przedłużki do mikroprobówek	PE8050	Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest rura PE 0,8x0,5 mm, 30 m
Kaniula polietylenowa (PE) ø zewnętrzna 0,8 mm x średnica wewnętrzna 0,5 mm	Przedłużki do mikroprobówek	PE9658	Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest rura PE 0,96x0,58 mm, 30 m
linijka	jakikolwiek		Można użyć dowolnej marki
Znaczniki	jakikolwiek		Można użyć dowolnej marki
Zapalniczki	jakikolwiek		Można użyć dowolnej marki
Klej cyjanoakrylowy	jakikolwiek		Można użyć dowolnej marki
Igły o rozmiarze 23	Livingstone Międzynarodowy	DN23GX0.75LV	Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj jednorazowa igła Livingstone, sterylna, 23GX0.75 cala, 100 / PUDEŁKO. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DN23GX0,75LV
Igły o rozmiarze 25	Livingstone Międzynarodowy	DN25GX1.0LV	Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj jednorazowa igła Livingstone, sterylna, 25GX1.0 cala, 100 / PUDEŁKO. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DN25GX1.0LV
Strzykawka 1 ml	Livingstone Międzynarodowy	T3SS01TA	Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj strzykawka Terumo 1 ml Slip Tuberculin 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS01TA
Strzykawka 10 ml	Livingstone Międzynarodowy	T3SS10SA	Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj strzykawka Terumo 10 ml Slip 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS10SA
Waciki z gazy	Livingstone Międzynarodowy	Zobacz materiał GSC075	Można użyć dowolnej marki i przyciąć ją do wymaganego rozmiaru. Przykładem są tutaj waciki z gazy wypełnione bawełną 7,5x7,5 cm, 8 warstw. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =GSC075
Poduszka grzewcza	Ratek	Element ZAWI1	Można użyć dowolnej marki, która utrzymuje temperaturę na poziomie 37C. Przykładem jest tutaj taca do podgrzewania Ratek.
Lampa chirurgiczna	Aparatura Harvarda	72-0215 z 72-0267	Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj aparat Harvard V-Lux 1000 Zimne źródło światła z bifurcated gooseneck Light Guide,, średnica włókna 4,7 mm (każde ramię). http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_50601_
Mikroskop chirurgiczny	Zeiss	Numer telefonu 495005-0014-000	Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj mikroskop stereoskopowy Zeiss Stemi 2000-C z podwójnym punktem Stand S i diodą LED KL 300. https://www.micro-shop.zeiss.com/?l=en&p=us&f=e&i=10143
Szew jedwabny	Livingstone Międzynarodowy	DTSK163019F4	Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest * Wyślij ten przedmiot e-mailem do mojego przyjaciela 3/8 Circle Reverse Cut Silk Sheture 3/0 Nitka 19mm. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DTSK163019F4
Ostrza skalpela	Narzędzia Precyzyjnej Nauki (FST)	Numer katalogowy 10020-00	Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj ostrze skalpela FST #20. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=191
Rękojeść skalpela	Narzędzia Precyzyjnej Nauki (FST)	Numer katalogowy 10004-13	Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj rękojeść skalpela FST #4. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=298&CategoryId=51
1 x małe nożyczki chirurgiczne	Narzędzia Precyzyjnej Nauki (FST)	Numer katalogowy: 14060-09	Można użyć dowolnej marki. Przykładem są tutaj cienkie nożyczki FST, 9 cm z krawędzią tnącą 21 mm, ostre, proste. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=40&CategoryId=17
2 x kleszcze z ząbkowaną zakrzywioną końcówką	Narzędzia Precyzyjnej Nauki (FST)	11001-13	Można użyć dowolnej marki. Przykładem są tutaj kleszczyki FST 13 cm o standardowym wzorze z zakrzywioną końcówką 2,8x1,4 mm. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=405&CategoryId=32
2 x hemostatyki	Narzędzia Precyzyjnej Nauki (FST)	Numer katalogowy 13010-12	Można użyć dowolnej marki. Nie wszyscy operatorzy używają hemostatów. Przykładem jest tutaj FST 12 cm Micro-Mosquito Hemostats o długości 20 mm x szerokości 1,3 mm ząbkowana, prosta końcówka. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=377&CategoryId=33
1 x uchwyt na igłę do szwów	Narzędzia Precyzyjnej Nauki (FST)	12001-13	Można użyć dowolnej marki. Przykładem jest tutaj uchwyt na igłę FST 13 cm Hasley z końcówką o długości 16 mm i szerokości 1,9 mm. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=254&CategoryId=70

powiedział: powiedział: TGL powiedział: powiedział: TGL