Opracowanie mysiego modelu rozsianego raka płuc w opłucnej

Streszczenie

Źródło: Yasui, H., et al. Fotoimmunoterapia w bliskiej podczerwieni dla mysich modeli rozsiewu opłucnej. J. Vis. Exp. (2021)

Ten film demonstruje metodę generowania mysiego modelu rozprzestrzeniania się opłucnej poprzez wstrzykiwanie zawiesiny komórek raka płuc do klatki piersiowej myszy z niedoborem odporności.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Generowanie modelu rozsiewu opłucnej

1. Przygotować komórki docelowe wykazujące ekspresję lucyferazy i zawiesić 1,0 × 10⁶ komórek docelowych w 100 μl soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS)
   nuta: Komórki raka klatki piersiowej, takie jak rak płuc i MPM, są odpowiednie jako komórki docelowe. Komórki wykazujące ekspresję lucyferazy przygotowano poprzez transfekcję genu lucyferazy, a wysoką ekspresję lucyferazy potwierdzono po > 10 pasażach komórkowych. Komórki hodowano w pożywce uzupełnionej 10% penicyliną w surowicy bydlęcej płodu (100 j.m./ml) i streptomycyną (100 mg/ml). Liczbę komórek dostosowano w zależności od tempa wzrostu guza i czasu trwania leczenia (1,0. × 10 5-6,0 × 10⁶ komórek/masę ciała).
2. Przygotuj 8-12-tygodniowe samice homozygotycznych atymicznych nagich myszy o preferowanej masie ciała 19-21 g.
3. Znieczulić myszy podczas zabiegu izofluranem (wprowadzenie: 4-5%, utrzymanie 2-3%); dociśnij ogon pęsetą, aby potwierdzić, że nie ma reakcji.
4. Zrób korek z pianki polistyrenowej i przymocuj korek do igły 30 G tak, aby końcówka pozostała na 5 mm, aby zapobiec uszkodzeniu płuc. Zegnij końcówkę igły czystymi kleszkami lub dociskając ją do twardego przedmiotu oczyszczonego 70% EtOH, aby uniknąć odmy opłucnowej (ryc. 1).
   ostrożność: Uważaj, aby się nie przekłuć. Użyj kleszczy, aby zgiąć igłę. Nie trzymać korka podczas mocowania go do igły. Bezpieczniej jest zatkać korek przed wlaniem komórek do strzykawki.
5. Napełnić strzykawkę (1 ml) komórkami docelowymi i przymocować igłę 30G z korkiem.
6. Przed zabiegiem należy zdezynfekować klatkę piersiową zwierzęcia 70% EtOH.
7. Wbij igłę w klatkę piersiową myszy przez przestrzeń międzyżebrową. Ze względu na opór stawiany w tym czasie przy uderzaniu o żebra, końcówka igły poruszała się w górę i w dół. Po przejściu przez przestrzeń międzyżebrową przyciśnij strzykawkę do myszy i wstrzyknij 100 μl komórek docelowych (ryc. 2).
   nuta: Mysz oddycha głęboko, gdy igła prawidłowo wejdzie do jamy klatki piersiowej. Dzięki zgięciu końcówki igły można uniknąć odmy opłucnowej i niewłaściwego wstrzykiwania komórek do płuc.
   nuta: Zaleca się nakłucie prawej ściany klatki piersiowej, aby uniknąć ryzyka przebicia ściany serca.
8. Obróć mysz 2-3 razy, aby rozprowadzić komórki w całej jamie klatki piersiowej.
9. Umieść mysz z powrotem w czystej i ciepłej klatce i monitoruj do czasu chodzenia. Po zabiegu mysz wybudzi się ze znieczulenia i będzie zachowywać się normalnie.

Wyniki

Rycina 1: Łatwe, ręcznie wykonane urządzenie do przeszczepu komórek. Przymocuj korek wykonany z pianki polistyrenowej do igły 30G tak, aby końcówka pozostała na wysokości 5 mm. Końcówka igły powinna być zgięta, aby uniknąć odmy opłucnowej.

Rycina 2: Wstrzykni...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Strzykawka 1 ml	TERUMO	Zobacz materiał SS-01T	Eksperyment na myszach
Igła 30G	Nipro	1907613	Eksperyment na myszach
BALB/cSlc-nu/nu	Japonia SLC
D-Lucyferyna (sól potasowa)	Chemiczny Kajmany	Numer katalogowy: 14681	do obrazowania bioluminescencyjnego i DLIT
Izofluran	Wako	Numer katalogowy: 095-06573	dla myszy anestezjologicznych
0,25 w/v% Trypsyna-1mmol/l Roztwór EDTA 4Na z czerwienią fenolową	Wako	209-016941	do hodowli komórkowej
RPMI-1640 z L-glutaminą i czerwienią fenolową	Wako	Numer katalogowy: 189-02025	do hodowli komórkowej

powiedział: