Barwienie fluoresceiną w autoimmunologicznym modelu szczura z suchym okiem w celu zbadania uszkodzenia rogówki

Streszczenie

Źródło: Hou Ahiua, et al. Przewlekły autoimmunologiczny model szczura z suchym okiem ze wzrostem liczby efektorowych limfocytów T pamięci w tkance gałki ocznej. J.Vis. Exp. (2017)

Ten film pokazuje barwienie uszkodzonej rogówki za pomocą barwnika fluoresceinowego, aby ocenić zakres autoimmunologicznej choroby suchego oka na modelu szczurzym. Zielone plamki fluorescencyjne barwionych włókien kolagenowych wskazują na uszkodzone komórki nabłonka rogówki.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Ocena cech zespołu suchego oka

Zmierz uszkodzenie rogówki za pomocą barwienia fluoresceiną.

1. Dodać 2 μl 0,2% fluoresceiny do rogówki szczura. Pasywnie otwórz i zamknij powieki szczura 3 razy palcem w rękawiczce, aby rozprowadzić barwnik fluoresceinowy na powierzchni oka.
2. Po 1 minucie nabierz 1 ml soli fizjologicznej za pomocą strzykawki o pojemności 3 ml (bez nasadki do igły), umieść strzykawkę około 2-3 mm przed rogówką i delikatnie wlej sól fizjologiczną do oka.
3. Uzyskuj obrazy pod filtrem kobaltowo-niebieskim (tj. ~400 nm) mikroskopu do obrazowania okulnego z wyłączonymi światłami tła.
   nuta: Obrazy zostały następnie przeanalizowane za pomocą systemu oceniania zmodyfikowanego w stosunku do poprzednich publikacji. Obrazy były następnie analizowane poprzez subiektywne ocenianie liczby, obszaru i intensywności zielonych plam od 0 do 2, gdzie 0 oznacza ich brak, 1 oznacza punktowe barwienie mniejsze niż 50 plam, a 2 oznacza punktowe barwienie więcej niż 50 plam.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Odczynnik
Roztwór sodu fluoresceiny	Bausch & Lomb Wielka Brytania Sp. z o.o	nie
sprzęt
Mikroskop stereoskopowy z oświetlaczem światła pierścieniowego i kamerą	Carl Zeiss	nie

.