Artykuł metodologiczny

Test molekularny do ilościowego oznaczania wirusów grypy A i B

857 wyświetleń

8 lipca 2025

W tym artykule

Streszczenie

Źródło: Otto, C. C. et al., Szybkie molekularne wykrywanie i różnicowanie wirusów grypy A i B. J. Vis. Exp. (2017)

Film demonstruje test do ilościowego oznaczania wirusów grypy A i B. Test ten wykorzystuje namnażanie endonukleazy za pomocą starterów specyficznych dla grypy i wykrywanie celów za pomocą sond molekularnych.

Protokół

Wszystkie procedury związane z pobieraniem próbek zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi instytutu IRB.

1. Przed uruchomieniem testu

UWAGA: Test na grypę A i B jest zatwierdzony dla próbek wymazów z nosogardzieli i dla wymazów z nosogardzieli przechowywanych w pożywkach transportowych wirusów. Waciki są dołączone do zestawu i powinny być używane w celu uzyskania optymalnej wydajności. Jednak do pobierania próbek wymazów z nosa można również użyć sztucznego jedwabiu, pianki, wymazów flokowanych lub poliestrowych wymazów z nosa.

  1. Aby pobrać próbkę wymazu z nosa, włóż wacik do nozdrza, które ma najbardziej widoczny drenaż lub które jest najbardziej zatłoczone. Delikatnie obracając, wepchnij wacik do nozdrza, aż napotkasz opór, i obróć kilka razy o ścianę nosa, a następnie powoli wyjmij go z nozdrza. Przechowywać wymazówki i transportować je w fiolkach zawierających 3 ml pożywki do transportu wirusów (VTM).
    UWAGA: Należy zwrócić szczególną uwagę na właściwe pobieranie próbek, ponieważ nieodpowiednie pobieranie próbek może dać błędne wyniki.
    UWAGA: Próbki wymazów należy przetestować jak najszybciej po pobraniu. Mogą być jednak przechowywane w temperaturze pokojowej do 2 godzin lub przechowywane w lodówce w temperaturze 2-8 °C przez maksymalnie 24 godziny, jeśli testy nie są natychmiast dostępne. Świeżo pobrane próbki są idealne dla optymalnej wydajności testu. Niewłaściwe obchodzenie się z próbką, przechowywanie i/lub transport mogą prowadzić do błędnych wyników.
    UWAGA: Jako środek ostrożności osoby wykonujące ten test powinny traktować wszystkie próbki jako potencjalnie zakaźne, przestrzegając uniwersalnych środków ostrożności podczas obchodzenia się z próbkami.
  2. Przed badaniem doprowadzić wszystkie próbki do temperatury pokojowej.
    UWAGA: Wszystkie komponenty testowe są przeznaczone wyłącznie do jednorazowego użytku i nie powinny być używane do wykonywania wielu testów. Nie mieszaj elementów zestawu z różnych numerów partii. Nie należy używać odczynników z zestawu po upływie ich daty ważności.
  3. Przed badaniem doprowadzić odbiornik niebieskiej próbki do temperatury pokojowej. Pomarańczową bazę testową można testować bez konieczności podgrzewania do temperatury pokojowej.
  4. Pozostaw wszystkie próbki do badań w foliowym opakowaniu do momentu bezpośrednio przed użyciem. Włącz instrument, naciskając przycisk zasilania z boku instrumentu. Wprowadź identyfikator użytkownika i naciśnij 'OK.

2. Przeprowadzanie testu

  1. Aby rozpocząć proces testowania, dotknij opcji "Uruchom test" na ekranie instrumentu. Wprowadź identyfikator pacjenta za pomocą klawiatury ekranowej lub skanera kodów kreskowych i naciśnij "OK". Otwórz pokrywę i włóż pomarańczową bazę testową do pomarańczowego uchwytu bazy testowej.
  2. Upewnij się, że na ekranie wyświetlany jest prawidłowy test i naciśnij "OK". Włóż niebieski odbiornik próbki do uchwytu niebieskiego odbiornika próbki.
    UWAGA: Nie otwieraj sample odbiornik przed umieszczeniem go w urządzeniu, ponieważ uniemożliwi to osiągnięcie przez bufor elucyjny prawidłowej temperatury roboczej i może wpłynąć na wydajność testu.
  3. Poczekaj, aż sample odbiornik się rozgrzeje. Po wyświetleniu monitu przez przyrząd zdejmij foliową uszczelkę i umieść wacik pacjenta, który ma być przetestowany, w ampodbiorniku próbki.
    UWAGA: Podczas zdejmowania folii połóż dwa palce na krawędzi ampampodbiornik, aby upewnić się, że pozostaje na swoim miejscu.
  4. Energicznie mieszaj wacik w płynie przez 10 sekund, dociskając główkę wacika do boku odbiornika próbki podczas mieszania, aby pomóc usunąć próbkę z wacika. Naciśnij "OK", aby kontynuować. Jeśli wymazówki testowe są przechowywane w pożywce transportowej wirusa, należy wirować VTM przez 10 sekund, a następnie dodać 200 μl do odbiornika próbki.
  5. Wciśnij białą kasetę transferową do niebieskiego sample odbiornik. Kontynuuj naciskanie ampodbiornik próbki, aż pomarańczowy wskaźnik się podniesie.
  6. Podnieś, a następnie podłącz wkład transferowy do podstawy testowej. Obserwuj, jak pomarańczowy wskaźnik opada po prawidłowym zamocowaniu transferu wkładu. Zamknij pokrywę i nie otwieraj, dopóki na ekranie nie pojawi się komunikat "Test zakończony".

3. Kontrola jakości (QC)

  1. Dotknij opcji "Uruchom test kontroli jakości" na ekranie głównym. Wybierz test kontroli jakości, który ma zostać uruchomiony. Potwierdź, że typ testu pasuje do próbki kontroli jakości przeznaczonej do testowania, dotykając "OK" i postępując zgodnie z instrukcjami wyświetlanymi na ekranie, aby zakończyć testowanie.

4. Interpretacja wyników

  1. Po zakończeniu testu obserwuj wyniki testu wyświetlane na ekranie wraz z interpretacją na obecność grypy A, B i nieznanych podtypów. W przypadku nieprawidłowych wyników powtórz test.

5. Konserwacja i czyszczenie

  1. Codziennie czyść instrument i otaczającą go ławkę 70% etanolem lub 10% roztworem wybielacza. Rozpyl roztwór czyszczący na wilgotną, niestrzępiącą się szmatkę do czyszczenia. Nie wylewaj roztworów bezpośrednio na instrument.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Alere i InstrumentAlere powiedział:NAT-000 (globalny), NAT-024 (USA)
Zestaw testowy Alere i Influenza A & B 24Alere powiedział:425-000 (globalny), 425-024 (USA)
Skaner kodów kreskowych Alere iAlere powiedział:EQ001001
Drukarka uniwersalna AlereAlere powiedział:55115 (Globalnie), alereiprinter (Stany Zjednoczone)
Pipeta precyzyjna 200 μl
Jednorazowe końcówki do pipet 200 μl
Pożywka transportowa wirusaRemelZobacz materiał M4-RT

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Wykrywanie grypy AWykrywanie grypy BAmplifikacja z u yciem endonukleazy nacinaj cejSondy typu Molecular BeaconAmplifikacja viralnego RNAKwantyfikacja fluorescencyjnaPrzetwarzanie pr bek z nosogardzieliObs uga wk adu transferowegoPrzygotowanie odbiornika pr bekWalidacja testu kontroli jako ci

Powiązane artykuły