Papierowy test immunologiczny do wykrywania immunoglobuliny G

Streszczenie

Źródło: Peng, Y. et al., Kowalencyjne wiązanie przeciwciał z krążkami z papieru celulozowego i ich zastosowania w testach immunologicznych gołym okiem.J. Vis. Exp. (2016)

Film demonstruje test immunologiczny oparty na papierze, obejmujący funkcjonalizowane aminami krążki celulozowe usieciowane aldehydem glutarowym. Kowalencyjna immobilizacja przeciwciał wychwytujących swoistych dla IgG-Fc, a następnie wprowadzenie immunoglobuliny G i przeciwciał detekcyjnych sprzężonych z peroksydazą chrzanową, powoduje zmianę koloru potwierdzającą obecność immunoglobuliny G.

Protokół

1. Szczepienie grup funkcyjnych aminy na krążkach z papieru celulozowego

1. Przygotuj jeden kawałek kwadratowego papieru o wymiarze 1 cm × 1 cm oraz 100 krążków papierowych wykonanych z papieru celulozowego klasy 1 o średnicy 6,0 mm (bibuła filtracyjna o średnim przepływie) za pomocą dziurkacza.
2. Aby wyprowadzić grupy -NH₂ na krążkach papierowych, należy zmieszać 1 ml 3-aminopropylotrimetoksysilanu (APS) i 10 ml acetonu w szklanej butelce o pojemności 50 ml w dygestorium. Dodać krążki papierowe do świeżo przygotowanej mieszaniny odczynników APS i inkubować przez 5 godzin z mieszaniem orbitalnym (200 obr./min) w temperaturz....

Wyniki

Rysunek 1.Widma podczerwieni z transformacją Fouriera (FTIR) nieobrobionego i poddanego działaniu APS kwadratowego bibuły filtracyjnej o średnim przepływie (A) i kwadratowej bibuły filtracyjnej o szybkim przepływie (B). Widma dla nieobrobionego kwadratowego bibuły filtracyjnej o średnim przepływie były podobne do widm kwadratowego bibuły filtracyjnej o średnim przep.......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Bibuła filtracyjna z celulozy, klasa 1 (bibuła filtracyjna o średnim przepływie)	GE Healthcare Pte Ltd Singapur	Numer katalogowy: 1001 110
Celulozowa bibuła filtracyjna, klasa 113 (bibuła filtracyjna o szybkim przepływie)	Sigma-Aldrich, Singapur	1113-320
3-Aminopropylotrimetoksysilan	Sigma-Aldrich, Singapur	Zobacz materiał T1255	>96%
Aldehyd glutarowy	Sigma-Aldrich, Singapur	G6257	Stopień II, 25% w H2O
Album surowicy bydlęcej	Sigma-Aldrich, Singapur	Certyfikat A2153
Odtłuszczone mleko w proszku	Ludwik François		Pakowane przez Kitchen Capers, Singapur
Baza Tris	Preparat Promega	Zobacz materiał H5135
Periodynian sodu	Merck	106597
Na2HPO4	Merck	106585
KH2PO4	Merck	104873
Zawartość NaCl	CALBIOCHEM (CALBIOCHEM)	567441
NaOH	Merck	106462
Hcl	Merck	100317
Bufor fosforanowy soli fizjologicznej (PBS)	N/a	N/a	PBS, zawierający 137 mmol/L NaCl, 2,7 mmol/L KCl, 8,0 mmol/L Na2HPO4 i 1,5 mmol/L KH2PO4, przygotowuje się z wodą i dostosowuje do pH 7,4 z 0,1 mol/L NaOH lub 0,1 mol/L HCl
aceton	Tee Hai Chem Pte Ltd Singapur	Zobacz materiał 9005-68
Mieszanina TMB i roztworu nadtlenku wodoru	1-stopniowe rozwiązanie ultra TMB-ELISA, Thermo Scientific Pierce	Numer katalogowy: 34029	1 L
Oczyszczone przeciwciało powlekające anty-mysie IgG-Fc przeciwko powinowactwu	Laboratoria Bethyl, Inc	A90-131A
Mysia surowica referencyjna	Laboratoria Bethyl, Inc	Złącze RS10-101-5	9,5 mg/ml
Sprzężone kozie przeciwciało anty-mysie IgG-Fc HRP	Laboratoria Bethyl, Inc	A90-131P
sprzęt
Spektrofotometr podczerwieni z transformacją Fouriera	Shimadzu IR Prestige-21	N/a
piekarnik	NUVE FN500	N/a
Mikser turbo VM-2000	MYC Sp. z o.o.	N/a
Obraz J	RGB, do pobrania za darmo	N/a

powiedział: powiedział: powiedział: powiedział: TGL