Kontrolowany wlew przeciwciał swoistych dla peptydu Aβ i oligomerów Aβ do hipokampa szczura

Streszczenie

Źródło: Sajadi, A., et al. Neurodegeneracja w zwierzęcym modelu przewlekłego nalewu oligomerów beta-amyloidu jest przeciwdziałana przez leczenie przeciwciałami z pompami osmotycznymi. J. Vis. Exp. (2016).

Ten film demonstruje technikę ciągłego wlewu przeciwciał specyficznych dla peptydu beta-amyloidu (Aβ) do hipokampa szczura. W badaniu zastosowano implantację obustronnego systemu kaniuli w celu kontrolowanego wlewu przeciwciał specyficznych dla peptydu Aβ w połączeniu z infuzją rozpuszczalnych oligomerów Aβ (Aβo) do hipokampa szczura w celu zbadania interakcji między oligomerami a przeciwciałami.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Przygotowanie cewnika przed operacją stereotaktyczną

1. Wytnij cewniki PE50 (o długości 6 cm), które będą używane do łączenia kaniuli z pompami osmotycznymi (patrz rysunek 1). Napełnij cewniki PE50 sztucznym płynem mózgowo-rdzeniowym (aCSF) i uszczelnij oba końce cewników. Cewnik należy utrzymywać w temperaturze 4°C do czasu użycia.

2. Implantacja kaniuli metodą stereotaksji

Wyniki

Rysunek 1. Zdjęcie zwierzęcia z obustronną kaniulą podczas infuzji Aβo. Roztwór Aβo (0,2 μg/μl; 1 μl) wstrzykiwano obudzonym i swobodnie poruszającym się szczurom (raz dziennie przez 6 dni) za pomocą cewników PE50 podłączonych do wewnętrznej kaniuli wprowadzonej do kaniuli prowadzącej. Leczenie przeciwciałem kontrolnym (Ctl) IgG1 lub 6E10 podawano bezpośrednio w miejscu infuzji Aβo .......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Sztuczny płyn mózgowo-rdzeniowy (aCSF)	Aparatura Harvarda	59-7316
Cewnik PE50 cienkościenny	Tworzywa sztuczne jeden	Zobacz materiał C232CT
Chlorowodorek ketaminy (100 mg/ml)	Nisza biologiczna	1989529
Chlorowodorek ksylaksyny (100 mg/ml)	Bimeda powiedział:	8XYL004C
Meloksykam (5 mg/ml)	Norbrook	Numer katalogowy: 215670I01
Roztwór glukonianu chlorheksydyny 2% i alkoholu izopropylowego 2%	Zabieg Carefusion	260100C
Chlorowodorek lidokainy	Alveda Pharma	Numer katalogowy: 0122AG01
Chlorowodorek bupiwakainy	Hospira	Rok 1559
Maść okulistyczna	Baussh i Lomb inc.	2125706
Ramka stereotaktyczna	Stoelting (Stoelting)	Numer katalogowy: 51600
Stereotaktyczne ramię uchwytu kaniuli	Aparatura Harvarda	Nr kat. 72-4837
wiertarka	Dremel	8050-N/18
Kaniula prowadząca	Tworzywa sztuczne jeden	326OPG/SPC
Kaniula iniekcyjna	Tworzywa sztuczne jeden	C315I/SPC
Atrapa kaniuli	Tworzywa sztuczne jeden	C315DC/SPC
Nici szwowe powlekane vicryl rapide 4-0	Etyka	Kontroler VR2297
Dentystyczny cement akrylowy	Aparatura Harvarda	Numer katalogowy: 72-6906
	Firma JI Morris	P0090CE125
Przeciwciało 6E10 (mysi izotyp IgG1)	Legenda biologiczna	803003
Mysie przeciwciało kontrolujące izotyp IgG1	Księga Abcam	AB18447
Pompy osmotyczne Alzet model 1007D	Korporacja Durect	290
Izofluran	Baxter	CA2L9100
Amyloid-beta 1-42	rPeptyd	A-1163-1
Strzykawka Hamilton (10 μL)	Fisher Scientique	14815279
Infuzyjna pompa strzykawkowa CMA 402	Aparatura Harvarda	CMA8003110
Strzykawka 1 ml	Bd	309659
Igła 21G	Terumo (Ziemia)	NN-2125R
Tulić	Lomir Biomedical	Zobacz materiał RTS04

TGL powiedział: szt.